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杨溢: 作品数：14 被引量：31H指数：4; 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>; 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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大肠杆菌Nissle 1917株鞭毛展示6His标签的构建及相关生物学特性分析被引量：1: 2016年; 为探索大肠杆菌Nissle 1917株(EcN)鞭毛展示的应用,本研究以重组质粒p UC18-fli C为模板,反向PCR产物经DpnⅠ、Exnase^(TM)Ⅱ重组环化,将6His标签基因分别插入无质粒大肠杆菌Nissle 1917(EcNcured of its two cryptic plasmids p MUT1和p MUT2;EcNc)fli C高变区774 bp^775 bp和792 bp^811 bp之间,构建嵌合鞭毛基因片段fliC01和fliC02。分别将其克隆于自杀性载体pRE112中,构建重组质粒pRE112-fliC01和pRE112-fliC02,并分别转化至EcNc中。通过一次重组和二次重组将嵌合鞭毛基因整合于EcNc基因组中,构建无抗性筛选的重组菌株EcNc fliC01和EcNc fliC02。对重组菌株进行生长状况、鞭毛形成以及体外细胞黏附试验和小鼠体内定植试验检测,结果表明EcNc fliC01和EcNc fliC02的生长未受影响,表达的嵌合鞭毛能够被H1多抗或His-Tag单克隆抗体识别并组装形成鞭毛丝;重组菌对IPEC-J2细胞的黏附能力及小鼠肠道定植能力与亲本株EcNc相比无显著性差异。本实验结果为进一步研究EcNc鞭毛展示技术应用于活疫苗研制奠定了基础。; 杨颖区炳明杨溢张倩杨玮枫夏芃芃朱国强; 关键词：鞭毛蛋白

沙门氏菌群体感应系统研究进展被引量：4: 2019年; 群体感应(QS)是细菌基于细胞密度变化而进行特定通讯的方式。QS细菌能产生并分泌1种称为自体诱导物(AI)的信号分子。细菌AI分子的分泌随着细菌细胞密度的升高而增加,从而调控基于细菌密度的基因表达。沙门氏菌是重要的人畜共患病病原菌,能利用3种细胞间信号传导机制收集环境信息和调控基因表达。本文中,笔者综述沙门氏菌三类QS系统研究现状,包括QS系统的构成及功能(尤其是致病性功能)探索,以期深入研究沙门氏菌QS相关致病机制并对沙门氏菌感染进行靶向有效防治。; 戴鹏杨溢赵亚荣羊扬羊扬鲍恩东李亚杰丁旭娜朱国强; 关键词：沙门氏菌群体感应系统自体诱导物

六十二株水貂源大肠杆菌分离株耐药表型与耐药基因及克隆菌群分析被引量：5: 2019年; 为了调查诸城地区某水貂养殖场粪便源大肠杆菌的表观及其分子特征,采集某个水貂养殖场的水貂粪便进行大肠杆菌分离鉴定,对分离鉴定的大肠杆菌进行血清型鉴定和对14种常见抗菌药物的耐药表型鉴定;使用PCR检测耐药基因以及Ⅰ整合子基因盒的携带情况,利用多位点序列分型(MLST)来分析菌株的克隆关系并构建系统发育树来分析相同克隆群菌株的遗传相似性。结果显示,自82份水貂粪便样品分离到62株大肠杆菌,分离率75.61%;大肠杆菌分离株对AMP和TET的耐药率超过90%,多重耐药菌株(MDR)占比为85.48%。PCR检测到5类耐药基因的存在,qnrS检出率最高,为61.29%(38/62);aaC2、aaC4、sul1和aac(6′)-Ib-cr耐药基因与菌株产生相应的耐药抗性存在一致性(P<0.01)。分离菌株中Ⅰ类整合子可变区域的优势结构为dfrA27-aadA2-qnrA。鉴定出致病性血清型的存在,且对应菌株都具有多重耐药性,优势血清型为O104:H4。分离株中存在33个STs,ST46为优势STs(16.13%),具有3个主要克隆群,依次为CC10、CC46和CC176;与致病性相关菌株的STs和人源大肠杆菌具有共同的遗传背景。本研究表明,养殖场的水貂受到致病性和多重耐药性大肠杆菌的污染,相同克隆群菌株的耐药基因分布具有多态性,表观特征差异明显。; 蒋智宇王凡杨溢衣首静杨杰鞠孜敬宋艳朱国强孙淑红; 关键词：耐药基因

大肠杆菌Nissle 1917鞭毛蛋白高变区部分缺失菌株特性研究: 引言细菌鞭毛展呈外源表位在疫苗设计方面具有独特的优势,沙门氏菌减毒株表达含有外源表位的嵌合鞭毛,其经粘膜途径接种,诱导了针对所表达外源表位的粘膜和系统免疫应答[1,2],但是沙门氏菌作为活菌疫苗载体,需考虑到在人群和动物...; 杨颖杨溢朱国强

Ⅲ型干扰素相关生物学功能的研究进展被引量：4: 2020年; 干扰素(Interferon,IFN)是一类具有多功能生物活性的糖蛋白,包含3个家族(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型)。Ⅲ型干扰素(TypeⅢinterferon,IFN-Ⅲ)是近16年发现的新型干扰素,其诱导过程及生物学功能与I型干扰素(TypeⅠinterferon,IFN-Ⅰ)相似,在抗病毒、免疫调节、抗肿瘤、抑制自身免疫病、抑制过敏性哮喘以及抗细菌和真菌等方面具有重要作用。本文将从IFN-Ⅰ和IFN-Ⅲ的分类、序列同源性和信号传导等方面进行阐述,并结合近年来IFN-Ⅲ在疾病治疗过程中所取得的成就,综述IFN-Ⅲ的生物学功能,旨在为IFN-Ⅲ的深入研究以及在多种疾病的诊断和防控中提供参考。; 洪天旗陶洁杨溢王鹏志杨溢; 关键词：生物学功能信号传导受体

丁酸梭菌影响肠炎沙门氏菌对SPF小鼠致病性的作用被引量：1: 2020年; 【目的】旨在探究丁酸梭菌影响肠炎沙门氏菌(CVCC3377)对SPF小鼠的致病性及对小鼠的保护作用。【方法】选用72只6周龄SPF级雌性C57BL/6小鼠,按照完全随机区组设计分为阴性对照(CON)、饲喂丁酸梭菌组(CB)、沙门氏菌感染组(SE)和丁酸梭菌保护组(CB+SE)4组,每组18只。CON组和SE组饲喂基础日粮和饮水,CB组和CB+SE组饲喂基础日粮和每天更换添加丁酸梭菌(1×10^7 CFU/mL)的饮水,连续饲喂一周;第8天进行肠炎沙门氏菌感染实验,分别对SE组和CB+SE组灌服0.2 mL 1.1×10^4 CFU/只的肠炎沙门氏菌,同时对阴性对照组和丁酸梭菌组灌服0.2 mL生理盐水。在感染后第6天处死小鼠并采集肝脏、脾脏和盲肠及内容物样品。采用H.E染色检测肝脏和脾脏组织的病理学变化,免疫组化检测脾脏组织中TLR4、MyD88蛋白的表达水平,荧光定量PCR检测盲肠组织中TNF-α和IL-6的表达水平,并通过高通量测序方法分析其对肠道菌群的影响。【结果】结果显示,丁酸梭菌能够缓解肠炎沙门氏菌感染引起的小鼠体重下降;H.E染色结果显示,丁酸梭菌可以缓解肠炎沙门氏菌感染造成的组织损伤;免疫组化结果显示,丁酸梭菌可降低脾脏组织细胞中TLR4、MyD88蛋白的表达水平,荧光定量PCR结果显示肠炎沙门氏菌能够显著升高盲肠组织中TNF-α(P<0.05)和IL-6的表达水平,在此基础上饲喂丁酸梭菌能够降低TNF-α和IL-6的表达水平。高通量测序结果显示,丁酸梭菌组Chao1指数、ACE指数和Shannon指数均高于对照组和沙门氏菌感染组(P>0.05),丁酸梭菌可显著降低放线菌门(Actinobacteria)和疣微菌门(Verrucomicrobia)在肠道微生物中的比例(P<0.05),另外,丁酸梭菌可以增加乳酸菌属在肠道微生物群落的相对丰度(P>0.05)。【结论】结果表明,丁酸梭菌可以提高小鼠免疫力,缓解由于沙门氏菌感染引起的炎症反应,增加肠道微生物多样性,调节肠道菌群结构。; 崔璐璐鞠孜敬杨溢张富友刘青霄朱国强孙淑红; 关键词：丁酸梭菌肠炎沙门氏菌高通量测序肠道菌群

肠炎沙门菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化被引量：2: 2014年; 为探讨肠炎沙门菌非编码小RNA(non-coding small RNA)IsrE在转录后水平是否参与对fimA的调控作用,在大肠杆菌中构建并表达FimA重组蛋白,并对其培养条件进行优化,制备高纯度FimA重组蛋白。利用原核表达载体p ET-28a(+)构建出能表达fimA的重组质粒,并分别对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间等条件进行优化,以提高目的蛋白的产量和增大其可溶性,最后经Ni-NTA亲和层析分离纯化FimA重组蛋白。通过酶切、测序和Western blot鉴定分析,成功构建并表达肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA,蛋白分子质量约为19.3 kDa,且主要以包涵体的形式表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后的重组蛋白在SDS-PAGE中显示单一条带。本研究构建、表达并获得纯度较高的重组蛋白FimA,为进一步研究和验证肠炎沙门菌非编码sRNA IsrE是否在转录后水平参与对fimA的调控奠定了基础。; 王勇祥孟霞段进坤周明旭周明旭杨溢陶洁; 关键词：肠炎沙门菌 ISRE 原核表达

大肠杆菌Nissle 1917隐秘质粒消除方法的建立被引量：2: 2016年; 质粒消除旨在获得无质粒菌株,是对益生菌进行遗传改造所需的一项重要技术。本试验建立在质粒不相容性的基础上,引入自杀性载体pRE112作为辅助工具,使用分子生物学方法构建重组自杀质粒pMUT1-pRE112和pMUT2-pRE112,将其分别导入携带2个大隐秘质粒pMUT1和pMUT2的益生菌大肠杆菌Nissle 1917(Escherichia coli Nissle 1917,EcN),利用重组自杀质粒去除EcN内原有隐秘质粒并在含有10%蔗糖的LB培养基上实施自杀质粒自身消除。结果试验成功获得EcN无质粒克隆菌株(Escherichia coli Nissle 1917cured of its two cryptic plasmids pMUT1and pMUT2,EcNc),为优质益生菌EcN更好的潜在应用研究奠定基础。; 杨颖区炳明朱军杨溢张倩杨玮枫夏芃芃朱国强; 关键词：质粒消除

抗沙门菌PEG菌毛单克隆抗体的制备及初步临床应用: 2018年; 为制备抗沙门菌PEG菌毛单克隆抗体(MAb),本研究从鸡白痢沙门菌(CVCC526)基因组中扩增菌毛蛋白基因peg A,将其克隆至原核表达载体pET-22b(+)中构建重组质粒pET-peg A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白rPegA。应用该蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选后获得1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株,命名为3D12,抗体亚类鉴定其属于IgG1亚类,腹水效价为1∶64 000。通过western blot和玻板凝集试验检测结果显示,该MAb与肠炎沙门菌、鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌呈阳性反应,而与鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌CE2、CE7、CE53、DH5α均不发生反应。以PEG菌毛MAb建立玻板凝集方法,检测本实验室临床分离保存的72份禽源沙门菌,同时以商品化沙门菌诊断血清作为平行对照,结果两种方法符合率达97.2%。本研究研制的MAb可用于沙门菌PEG菌毛基础研究和快速检测。; 杨溢杨玮枫张东孟霞孟霞袁天梅朱春红朱国强; 关键词：沙门菌 MAB

沙门氏菌群体感应系统研究进展: 群体感应(QS)是细菌基于细胞密度变化而进行特定通讯的方式.QS细菌能产生并分泌1种称为自体诱导物(AI)的信号分子.细菌AI分子的分泌随着细菌细胞密度的升高而增加,从而调控基于细菌密度的基因表达.沙门氏菌是重要的人畜共...; 戴鹏DAI PengYANG Yi杨溢赵亚荣ZHAO Yarong羊扬YANG Yang刘彦红LIU Yanhong; 关键词：沙门氏菌群体感应系统自体诱导物

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