王志建
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫控制重点开放实验室更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 2014—2015年我国华东部分地区猪流行性腹泻病毒的检测及S基因的序列分析被引量：5
- 2016年
- 采用RT-PCR方法对2014年至2015年送至实验室的104份腹泻仔猪小肠组织病料进行检测,结果显示42份为猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性,选择不同地区的7份阳性病料进行S基因克隆和测序,并与Gen Bank中已发布的PEDV S基因比对分析。核苷酸和氨基酸比对结果显示,7株流行毒株S基因核苷酸和氨基酸序列的同源性分别是98.1%～99.2%和97.6%～99.1%。该7株流行毒株与经典毒株CV777和DR13核苷酸序列的同源性分别为94.0%～94.2%和93.9%～94.1%,氨基酸序列的同源性分别为93.1%～93.6%和92.5%～93.1%。S基因进化树分析结果表明,根据S基因的变异情况PEDV可以分为3个型,本试验分析的7株PEDV流行毒株均属于Ⅲ型,与2012年以来中国流行毒株的亲缘关系较近,与国外传统毒株和中国较早分离到的毒株的亲缘关系较远。
- 王广操陆倩倩张梦岩许长萌王志建王先炜
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因遗传变异分析
- 慢病毒载体介导稳定表达pAPN的Vero细胞系的构建及应用被引量：1
- 2017年
- 将完整的pAPN序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-mCherry,并将该重组质粒pLVX-mCherry-pAPN与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP-VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染Vero细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达pAPN的细胞。通过RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)证明了所获细胞株能够稳定表达pAPN蛋白,命名为Vero-APN-B6。IFA试验和TCID50试验结果表明:与Vero细胞相比,Vero-APN-B6更能促进猪流行性腹泻病毒(PEDV)的增殖。利用该细胞株成功地从猪小肠组织中分离到了PEDV SC-MS株;经过鉴定该毒株为变异毒株。
- 陆倩倩王广操许长萌王志建王先炜
- 关键词：细胞系慢病毒载体PEDV
