李大鹏
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素对细胞毒性机制的研究
- <正>副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,H.parasuis)是引起剐猪嗜血杆菌病的病原,该病主要表现为多发性浆膜炎、关节炎及脑腆炎。细胞致死膨胀毒素(Cytolethal distending t...
- 牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌细胞毒性分子机制
- 文献传递
- 胸膜肺炎放线杆菌relA基因缺失株的构建及其生物学特性的研究被引量：3
- 2017年
- 为探究信号分子4或5磷酸鸟苷[(p)ppGpp]对胸膜肺炎放线杆菌(APP)适应性及致病性影响,本研究以APP血清7型S8为亲本株,通过同源重组、卡那抗性及蔗糖负向筛选的方法,将(p)ppGpp的合成调控基因relA敲除,构建缺失突变株S8△relA。生物学特性鉴定结果表明,S8△relA具有良好的遗传稳定性,与亲本株增殖速度变化差异不显著,但平台期营养限制环境下,S8△relA存活能力降低,而且在Gly、Ile、Val营养缺失时,S8△rel生长能力显著抑制;S8△relA的持留菌形成能力、生物膜形成能力以及体外抗肺泡巨噬细胞(PAM)吞噬能力均有不同程度降低;对小鼠致病性试验结果显示,S8△relA相比亲本株S8毒力降低2.7倍。研究结果表明(p)ppGpp在环境胁迫下参与APP适应性调控,并对其毒力有一定的影响。本研究首次证明了(p)ppGpp作为一种信号分子,同样可以调控APP的生长,并且在宿主肺部弱营养环境条件下,APP与致病力相关的表型均受到影响,这为进一步阐明APP的致病机制提供实验依据。
- 李婷婷李刚刘双红徐胜奎李大鹏王春来刘伟石
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌基因缺失株
- 副猪嗜血杆菌间接ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2016年
- 为建立一种快速检测副猪嗜血杆菌(HPS)的血清学方法,本实验采用重组表达的HPS细胞致死膨胀毒素B亚基蛋白(r Cdt B)作为包被抗原,并对各反应条件进行优化,建立了检测HPS血清抗体的间接ELISA方法。以该方法检测HPS阳性血清和其他猪病病原阳性血清,除了HPS阳性血清呈阳性外,其余均为阴性,表明该方法特异性良好。批内重复和批间重复的最大变异系数分别小于7%和8%。此外,将Cdt B-ELISA方法与商品化试剂盒Bio Chek HPS-Opp A间接ELISA抗体检测方法对背景明确的116份HPS阳性血清和112份HPS阴性血清进行检测,商品化试剂盒阳性符合率为25%,阴性血清符合率为100%,总符合率为62%,其中Cdt B-ELISA方法对阳性血清的检出率高于商品化试剂盒。应用Cdt B-ELISA方法检测330份临床猪血清样品,结果显示,HPS抗体阳性检出率为11.8%。该方法可以用于HPS的临床检测,为HPS流行病学调查和防控提供了一种快速有效的检测方法。
- 刘双红李大鹏徐胜奎谢芳李刚李婷孙斌王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌间接ELISA
- 以胸膜肺炎放线杆菌菌影作为佐剂的猪圆环病毒亚单位疫苗的研究被引量：3
- 2018年
- 为评价胸膜肺炎放线杆菌菌影(APP-BGs)作为猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白(Cap)亚单位疫苗佐剂的效果,本实验原核表达及纯化了重组Cap蛋白(r Cap),并分别以法国ISA61(r Cap+ISA61)和APP-ghost(r Cap+APP-ghost)作为佐剂两次免疫仔猪,并设PCV2灭活苗组和对照组,在加强免疫14 d后攻毒。结果显示,r Cap+APP-ghost组仔猪的抗体水平显著高于r Cap+ISA61组(p<0.05);攻毒后,r Cap+APP-ghost组仔猪未检测到病毒血症,而对照组仔猪在攻毒后14 d^28 d检测到病毒血症;攻毒后28 d,r Cap+APP-ghost组仔猪腹股沟淋巴结中的病毒载量显著低于r Cap+ISA61组和对照组仔猪的病毒载量(p<0.05);同时,r Cap+APP-ghost组仔猪相对体质量增长率显著高于对照组仔猪的相对体质量增长率(p<0.05)。以上结果表明,APP ghost可以作为有效的佐剂增强机体免疫反应,提高机体的抗病原感染能力。
- 徐胜奎李婷婷赵谦李大鹏李刚刘思国刘长明冯力王春来
- 关键词：CAP蛋白佐剂
- 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白的表达及其免疫保护效力分析被引量：6
- 2016年
- 为评价副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素CdtB蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护效力,本研究以H.parasuis血清5型参考菌株Nagasaki基因组为模板,通过PCR扩增cdtB基因,将cdtB基因去除信号肽编码序列后克隆于pET-22b(+)载体中,构建重组质粒pET-cdtB,并在E.coli BL21(DE3)感受态中诱导表达。结果显示,重组CdtB蛋白(rCdtB)以可溶形式表达。以纯化后的100μg蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,2周后进行一次加强免疫并进行血清抗体检测,其抗体效价高于1:25 600,表明该蛋白具有良好的免疫原性。淋巴细胞增殖试验结果表明rCdtB能够显著刺激小鼠T淋巴细胞增殖。此外,分别以5 LD_(50)的H.parasuis血清5型HN10菌株和血清13型ZD12菌株攻毒,结果表明rCdtB可以对血清5型HN10菌株提供60%以上的免疫保护力,而对血清13型ZD12菌株可以提供50%以上的免疫保护力,这表明rCdtB可以作为重组亚单位疫苗的候选抗原蛋白。
- 李大鹏徐胜奎刘双红李刚王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌原核表达免疫保护
- 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素各亚基处理PK-15细胞的基因表达谱分析被引量：1
- 2015年
- 为研究副猪嗜血杆菌(H.parasuis)细胞致死膨胀毒素(CDT)各亚基(Cdt A、Cdt B和Cdt C)的相关生物学功能,本研究采用基因芯片技术对以CDT各亚基处理的PK-15细胞基因表达谱进行检测和分析。通过比较各亚基处理细胞与空白对照细胞基因表达谱的检测结果显示,Cdt A、Cdt B和Cdt C作用PK-15细胞后,处理细胞中分别有91个基因、126个基因及135个基因出现差异表达变化。根据芯片结果选取变化较显著的基因进行荧光定量RT-PCR验证,结果与基因芯片检测结果基本一致。基因注释(GO)分析表明,这些蛋白分别参与免疫系统调节、生物调控、代谢过程和定位等过程。本研究结果为进一步研究CDT的致病作用机制奠定了基础。
- 牛惠李艳玲周泷李大鹏张艳禾李刚谢芳王春来
- 关键词：副猪嗜血杆菌
