李思佳
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医学院医学检验系更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于miRNA-30的RNAi表达框架的构建及其有效性验证被引量：1
- 2016年
- 目的构建基于人源性miRNA-30,针对EGFP基因的RNAi表达框架并验证其有效性。方法融合PCR构建RNAi表达框架,经凝胶电泳、测序比对及二级结构预测后,将该表达框架与p EGFP-N2质粒共转染A549、HCT116及HEK-293细胞,48 h后倒置荧光显微镜观察EGFP的表达情况并用流式细胞仪检测平均荧光强度。结果凝胶电泳和测序比对均显示RNAi表达框架与设计的相符,二级结构预测显示,新型RNAi表达框架与人源性miRNA-30的二级结构高度相似;共转染该表达框架与p EGFP-N2质粒48 h后,倒置荧光显微镜观察结果显示,3种细胞的荧光强度均明显减弱,流式细胞仪检测结果显示,3种细胞中共转染组与单独转染组相比平均荧光强度的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论新型RNAi表达框架构建成功,且能有效干扰EGFP在A549,HCT116和HEK-293细胞中的表达。
- 李亚红赵丹丹李思佳覃淇邱彤彤彭剑雄
- 关键词：RNAIA549细胞HCT116细胞HEK-293细胞
