李玲玉
- 作品数：1 被引量：8H指数：1
- 供职机构：华中农业大学水产学院农业部淡水生物繁育重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 青鳉prdm14的原核表达、多克隆抗体制备及其应用被引量：8
- 2017年
- 青鳉(Oryzias latipes)是研究遗传发育和细胞多能性的重要模式鱼类,为探究prdm14同源基因的潜在作用,实验将青鳉prmd14经原核表达后制备了兔抗Prdm14多克隆抗体。首先,将prdm14基因的部分编码区连接到p ET32a质粒中,构建重组表达载体p ET32a-prdm14?600。随后将重组载体转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,获得分子量为60 k D的Prdm14重组蛋白。接着大量诱导蛋白表达并切胶纯化,免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),6周后获得阳性抗体,最后通过ELISA和Western blot检测抗体效价及其特异性。结果显示,在37℃、0.6 mmol/L IPTG、诱导3h的条件下,可获得Prdm14重组蛋白的高效表达;制备的兔抗青鳉Prdm14多克隆抗体能够特异性识别青鳉组织中表达的Prdm14蛋白以及在Hep G2细胞中过表达的青鳉Prdm14:EGFP融合蛋白。综上所述,研究首次制备了一种能有效识别青鳉Prdm14的多克隆抗体,该抗体的获得为后续研究prdm14基因在鱼类多能性干细胞中的作用提供了有力工具。
- 李玲玉方健于淼陈天圣
- 关键词：青鳉原核表达多克隆抗体干细胞
