王士霞
- 作品数：8 被引量：15H指数：2
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省博士后科研启动基金国家重点实验室开放基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 牛病毒性腹泻黏膜病毒E2基因的原核表达与免疫原性分析被引量：2
- 2017年
- [目的]原核表达牛病毒性腹泻黏膜病毒(BVDV)E2基因编码蛋白。[方法]采用PCR方法从BVDV中扩增E2基因片段,与原核表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-E2,转化E.coli(Rosetta)感受态细胞,重组菌用1 mmol/L IPTG诱导表达E2蛋白,进行SDS-PAGE电泳,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化目的蛋白,经Western blot分析鉴定免疫原性。[结果]重组质粒pET-32aE2经PCR及酶切鉴定证明构建正确,重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为58 kDa,纯化后E2重组蛋白浓度0.521 mg/mL,Western blot分析表明,其能被BVDV阳性血清识别,具有很好的免疫原性。[结论]E2蛋白成功表达,为后续建立BVDV检测方法奠定了基础。
- 王宇婷马莉莉李晓月王士霞毕莹倪宏波
- 关键词：E2基因原核表达
- 牛产肠毒素性大肠杆菌菌蜕的制备及裂解条件优化
- <正>引言菌蜕（bacterial ghosts）又称菌影,是无繁殖能力、缺乏细胞浆和核酸的细菌空壳,通过噬菌体PhiX174的裂解基因E在革兰氏阴性菌内表达而形成[1,3]。裂解基因E表达后,细菌的内外膜融合形成跨膜孔...
- 王士霞常春龙翟军军朴范泽倪宏波
- 文献传递
- 牛多杀性巴氏杆菌菌影的制备被引量：1
- 2017年
- 试验以pHH43质粒为模板,通过PCR扩增含噬菌体Phi X174裂解基因E和CI857-PL-PR温控系统的温敏裂解盒CI857-PL-PR-E,再将该裂解盒插入到pPBA1100穿梭载体中,构建裂解质粒pPBA1100-E。利用细菌接合转化法将其转入牛多杀性巴氏杆菌中,通过溶菌动力学试验检测裂解质粒pPBA1100-E对牛多杀性巴氏杆菌的裂解效果并计算裂解效率。结果表明成功构建了裂解质粒pPBA1100-E,并将其成功地转入到牛多杀性巴氏杆菌中,溶菌动力学试验说明裂解质粒pPBA1100-E在牛多杀性巴氏杆菌中具有很高的溶菌效率,裂解效率为99.997%。因此,试验成功地制备了牛多杀性巴氏杆菌菌影,为进一步成功研制牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗奠定了坚实的基础。
- 常春龙王士霞翟军军倪宏波
- 牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的制备及其免疫效力分析
- 为分析牛多杀性巴氏杆菌菌影疫苗的免疫效力,本试验以pHH43质粒为模板,通过PCR扩增含噬菌体PhiX174的裂解基因E和CI857-PL-PR启动阻遏系统组成的温敏裂解盒CI857-PL-PR-E,再将裂解盒插入到pP...
- 常春龙王士霞翟军军倪宏波
- 关键词：保护效力
- 文献传递
- 牛致病性大肠杆菌菌影的制备
- 2016年
- 制备牛源大肠杆菌菌影,为其作为疫苗及载体奠定基础。将裂解质粒PHH43-E电转入牛大肠杆菌中,并通过温度的改变诱导细菌裂解,即其在37℃条件下生长到对数生长期,然后进行42℃升温诱导。经温控诱导裂解质粒表达后可将细胞壁裂解,形成细菌空壳,成功制备了菌影。
- 王士霞常春龙翟军军倪宏波
- 关键词：致病性大肠杆菌
- 牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕的制备及裂解条件的优化
- 2018年
- 目的制备牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对裂解条件进行优化。方法将裂解质粒pHH43电转入牛肠产毒素性大肠埃希菌中,37℃培养至A_(600)值为0.6时,升温至42℃诱导裂解,制备菌蜕。同时对起始诱导A_(600)值(0.4、0.6、0.8、1.0、1.2)和培养基成分含量(2/3、3/4、4/5和正常含量)进行优化,并计算裂解效率。结果在起始诱导A_(600)值为0.6,培养基营养成分为正常含量的3/4时,裂解效率最高,达99.93%。结论成功制备了牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对其制备条件进行了优化,为进一步开展对其免疫效果和佐剂效应等研究奠定了基础。
- 王士霞常春龙翟军军倪宏波
- 关键词：裂解
- 牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2016年
- 为建立一种检测牛病毒性腹泻、黏膜病病毒抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白并纯化,使用纯化后的蛋白作为包被抗原。确定最佳抗原包被浓度为6μg·m L-1,最佳血清稀释度为1∶80,最佳包被液为碳酸缓冲液,最佳盐封闭液为5%脱脂乳,最佳血清作用时间为60 min,酶标抗体作用最佳浓度为1∶10 000;最佳底物作用时间为5 min,阳性临界值为D450 nm≥0.282。与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较,总符合率为91.5%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%。该方法与牛副流感病毒Ⅲ型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛冠状病毒阳性血清无交叉反应。因此,该ELISA诊断方法可用于大批量样本抗体水平监测和流行病学调查。
- 常敬伟邢思毅常春龙毕莹王士霞李田田周玉龙倪宏波
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白间接ELISA
- 牛群爆发口腔黏膜溃疡类疾病的实验室诊断被引量：6
- 2015年
- 牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎和牛恶性卡他热能引起牛出现呼吸道、消化道症状,通过临床症状很难鉴别诊断。2014年8月,大庆市某牛场爆发了以口腔黏膜溃疡为特征的传染病。通过PCR和基因测序方法对上述疑似牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎和牛恶性卡他热的病例进行了鉴别诊断,结果确诊牛恶性卡他热是造成该牛群爆发疫病的主要病因,为该病的防治提供了理论依据。
- 邢思毅倪宏波周玉龙常春龙常敬伟李田田王士霞
- 关键词：牛病毒性腹泻牛恶性卡他热巢式PCR
