马妍
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆理工大学药学与生物工程学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组赖氨酸内肽酶构建表达及活性方法研究被引量：1
- 2015年
- 设计了重组赖氨酸内肽酶蛋白氨基酸序列,根据P.Pastoris酵母密码子偏爱性原则设计c DNA序列,其中TGA和TAA为两个终止密码子序列,并在序列5’端和3’端分别设计Xho I(CTCGAG)和Not I(GCGGCCGC)限制性酶切位点,将其重组到原核表达质粒p MD19-T中,得到p MD19-T-Lys-C,并在毕赤酵母中获得表达。应用SDS-PAGE电泳及免疫斑点法检测其表达,RP-HPLC分析重组赖氨酸内肽酶可以特异性切除赖氨酸基团C末端的氨基酸残基,证明该重组的赖氨酸内肽酶可替代Lysyl Endopeptidase应用于胰岛素的制备工艺中。
- 马妍付志成范开
- 关键词：基因重组胰岛素原活性
- 短C肽门冬胰岛素制备工艺的研究
- 2015年
- 为研究门冬胰岛素制备工艺,参照毕赤酵母偏好密码子,设计合成N-端连接引导肽EEAEAEAEPK,以KEWK作为短C肽,A、B链结构完整的门冬胰岛素c DNA序列。利用Xho I-Not I酶切位点将其插入表达质粒p PICZαA,采用电转移方法将重组质粒转入毕赤酵母x-33,筛选高拷贝重组子作为工程菌株进行高密度发酵,表达量可达到0.57 g/L。发酵液经金属螯合层析和SP阳离子层析纯化后鉴定正确。建立CPB/Trypsin双酶切工艺,对不同温度及p H条件下产生的酶切产物进行分析,初步建立了酶切最佳p H值和温度条件。酶切产物经纯化后制得纯度为91.7%的门冬胰岛素,副产物为B链30位缺失的门冬胰岛素。该设计方法为含短C肽EWK门冬胰岛素制备中选用Lys-c酶切成本过高的问题提供了备选解决方案。
- 付志成马妍张增涛刘日勇何勇范开
- 关键词：门冬胰岛素毕赤酵母纯化
