付志成
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：重庆理工大学更多>>
- 相关领域：化学工程医药卫生更多>>
- 短C肽门冬胰岛素制备工艺的研究
- 2015年
- 为研究门冬胰岛素制备工艺,参照毕赤酵母偏好密码子,设计合成N-端连接引导肽EEAEAEAEPK,以KEWK作为短C肽,A、B链结构完整的门冬胰岛素c DNA序列。利用Xho I-Not I酶切位点将其插入表达质粒p PICZαA,采用电转移方法将重组质粒转入毕赤酵母x-33,筛选高拷贝重组子作为工程菌株进行高密度发酵,表达量可达到0.57 g/L。发酵液经金属螯合层析和SP阳离子层析纯化后鉴定正确。建立CPB/Trypsin双酶切工艺,对不同温度及p H条件下产生的酶切产物进行分析,初步建立了酶切最佳p H值和温度条件。酶切产物经纯化后制得纯度为91.7%的门冬胰岛素,副产物为B链30位缺失的门冬胰岛素。该设计方法为含短C肽EWK门冬胰岛素制备中选用Lys-c酶切成本过高的问题提供了备选解决方案。
- 付志成马妍张增涛刘日勇何勇范开
- 关键词：门冬胰岛素毕赤酵母纯化
- 重组门冬胰岛素在毕赤酵母中的高效表达
- 胰岛素作为机体内唯一能够降低血糖的激素，该类药物对于胰岛素的分泌或作用缺陷造成的慢性高血糖引发糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱进而造成多种并发症的各种类型糖尿病，尤其是胰岛素依赖型糖尿病的治疗非常重要。胰岛素药物上市已长达八十年...
- 付志成
- 关键词：胰岛素类似物毕赤酵母表达发酵菌蛋白纯化
- 文献传递
