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黄志健
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1
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供职机构:
广东药学院生命科学与生物制药学院
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发文基金:
广东省科技计划工业攻关项目
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相关领域:
生物学
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合作作者
陈伟
广东药学院生命科学与生物制药学...
赵林
广东药学院生命科学与生物制药学...
李黄金
广东药学院生命科学与生物制药学...
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广东药学院学...
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β-半乳糖苷酶供体片段定点突变、表达、纯化与活性分析
2010年
目的构建含ε-NH2标记位点的克隆酶供体免疫分析(CEDIA)系统供体片段。方法从大肠杆菌基因组克隆β-半乳糖苷酶(β-gal)的α片段基因,通过定点突变在原精氨酸位点处引入赖氨酸突变,与硫氧环蛋白(Trx)融合表达后与Δα片段进行酶学互补活性分析。结果克隆的α片段为β-galN端1-56多肽片段,定点突变得R14K、R53K和R14K/R53K等3种突变体。融合表达产物经亲和层析后纯度达到90%以上,且4种α片段的纯度基本一致。各纯化产物显示了不同的酶学互补活性,其中R53K突变体的活性远高于R14K和R14K/R53K的,且与野生型α片段的基本一致。结论α片段R53K突变体具有作为CEDIA系统含内部标记位点供体的潜力。
李黄金
陈伟
赵林
黄志健
关键词:
Β-半乳糖苷酶
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