李建军
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：解放军总政治部更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Akt重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞生存的影响被引量：3
- 2012年
- 目的构建携带Akt基因的重组腺病毒载体,初步研究其对肝癌细胞生存的影响。方法分别将Akt-wt及Akt-dn基因亚克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA,采用RAPAd○RCMV腺病毒表达系统构建重组腺病毒并用PCR鉴定,以蛋白质印迹检测Akt及其下游GSK3β、p-GSK3β的表达,后将Akt重组腺病毒感染肝癌SK-HEP-1细胞,检测血清饥饿24h后细胞存活情况。结果酶切pacAd5 CMV-Akt-wt和pacAd5 CMV-Akt-dn均获得大小为6 kb和1.44 kb(Akt)的两个片段。PCR扩增得到1.44 kb左右的条带。蛋白质印迹结果显示两组中p-GSK3β表达有明显差别,肝癌SK-HEP-1细胞存活率在感染pacAd5 CMV-Akt-dn组较感染Akt-wt腺病毒组明显降低。结论成功构建了Akt-wt及Akt-dn基因重组腺病毒载体,并初步发现其有促进肝癌细胞死亡作用,为体内外进一步研究Akt基因及其相关信号通路在肝癌发生发展中的作用奠定了基础。
- 陈可和韩泽龙李建军潘金飞刘安玲
- 关键词：AKT腺病毒肝细胞癌
- IL-7和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的:构建白细胞介素7(IL-7)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)共表达的重组腺病毒载体,为进一步感染干细胞奠定基础。方法:将目的基因IL-7克隆到含有报告基因EGFP的穿梭质粒中,然后再将构建的重组穿梭质粒转移至pAdxsi载体中,构建重组腺病毒载体质粒,继而在H293细胞中扩增,纯化后测定病毒滴度。结果:pShuttle-EGFP-mIL7重组穿梭质粒经酶切鉴定得到0.5kb和5.1kb 2条带;pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体质粒经酶切鉴定得到14K、11.8K、3.1kb、2.66kb、2.47K、1.45K、0.6K 7条带;TCID50法测定纯化后的病毒滴度为2×1010pfu/ml。结论:pAdxsi-EGFP-mIL7重组腺病毒载体构建成功。
- 宁昌余长林李建军胡锴勋
- 关键词：白细胞介素7增强型绿色荧光蛋白重组腺病毒载体
