肖涛
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省社会发展科技攻关计划项目贵阳市科学技术计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 阿德福韦衍生物灌胃给药后的代谢产物阿德福韦在大鼠体内的药动学研究被引量：1
- 2019年
- 目的:建立阿德福韦(PMEA)的含量测定方法,并研究阿德福韦衍生物[阿德福韦前药,阿德福韦-熊去氧胆酸-3-丙基酯,L-亮氨酸-3-丙基酯(PMEA-1c)]灌胃给药后的代谢产物PMEA在大鼠体内的药动学。方法:采用高效液相色谱-串联质谱(HPLCMS/MS)法。色谱柱为BEH C_(18),流动相为0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水(梯度洗脱),流速为0.25 mL/min,柱温为30℃,进样量为1μL;检测离子对为PMEA质荷比(m/z)274.1→162.1,葛根素(内标)m/z 417.1→267.1。12只大鼠随机分为阿德福韦酯(ADV)组(阳性对照,90 mg/kg)、PMEA-1c组(160 mg/kg),每组6只,分别灌胃给予相应药物1次,于给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24 h尾静脉取血测定PMEA血药浓度;利用DAS 2.0软件计算相关药动学参数。结果:PMEA检测质量浓度线性范围为6.1～440.0 ng/mL(r=0.998 5),日内、日间精密度和稳定性试验的RSD均<10%(n=3、5、6),准确度为82.16%～97.33%(RSD≤6.4%,n=5),基质效应为95.96%～106.35%(RSD≤4.9%,n=5);ADV组和PMEA-1c组大鼠血浆中PMEA的t_(1/2)分别为(1.762±0.117)、(2.548±0.174)h,AUC_(0-24) h分别为(2 170.059±146.091)、(4 704.257±176.792)μg·h/L,c_(max)分别为(613.092±9.504)、(697.295±15.275)μg/L;与ADV组比较,PMEA-1c组大鼠t_(1/2)、AUC_(0-24 h)、AUC_(0-∞)、c_(max)均显著增加(P<0.01或P<0.001)。结论:建立的方法准确可靠,本实验结果表明PMEA-1c代谢为单室模型,其可作为阿德福韦前药的潜力药物,为阿德福韦前药的继续研究奠定了基础。
- 肖涛杨洋杨洋李静李韬吴帝容李静肖红
- 关键词：阿德福韦高效液相色谱-串联质谱药动学
- 一种防治艳山姜叶病害的化学药剂筛选方法
- 本发明提供公开了一种防治艳山姜叶病害的化学药剂筛选方法，它是将70%甲基托布津或25%咪鲜胺分别配制成含有有效成分1.25‑40.00μg/ml质量浓度的10ml浓液；然后在培养皿中加入1ml配好的浓液，外加已灭菌并降温...
- 龙庆德张旭李启瑞肖涛何明辉
- 文献传递
- 稳定表达hOAT1的HEK293细胞系的建立及鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的构建人肾脏近曲小管阴离子转运体1(human organic anion transporter 1,hOAT1)-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)质粒,获得稳定表达pEGFP-hOAT1的HEK-293细胞系。方法构建EGFP与hOAT1的融合基因表达载体pEGFP-hOAT1,并利用FuGENE 6转染试剂将其转染至HEK293细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,经G418抗性筛选获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术,检测稳定转染细胞及正常细胞hOAT1 mRNA和蛋白的表达情况,并进一步用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)考察稳定转染细胞的对氨基马尿酸摄取能力,以及丙磺舒对hOAT1的抑制作用。结果使用该文的方法,细胞转染率可达90%。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot,以及对氨基马尿酸摄取、丙磺舒抑制实验结果显示,相对于正常组,转染细胞在荧光显微镜下呈绿色荧光,其hOAT1表达均呈阳性(P<0.01);稳定转染细胞的对氨基马尿酸摄取能力明显升高(P<0.05),且丙磺舒对hOAT1有明显的抑制作用(P<0.05)。结论高效快速地建立了稳定高表达hOAT1的HEK293细胞系,为核苷类膦酸类似物这类药物引起的临床剂量依赖性肾毒性的机制研究奠定了模型基础,也为体外研究hOAT1底物或抑制剂的筛选提供了一个便利的工具。
- 李静杨洋肖涛杨洋欧瑜肖涛刘亭
- 关键词：融合蛋白稳定转染HEK293细胞丙磺舒
- 人寡肽转运体1转染MDCK细胞与转染HeLa细胞的比较研究被引量：1
- 2017年
- 目的筛选出更适宜的转染受体细胞,提高构建人寡肽转运体1(human peptide transporter 1,hPepT1)高表达细胞系的效率。方法利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA3.1(+)-hPepT1质粒分别转染进MDCK细胞与HeLa细胞,并进行单克隆细胞的挑选和扩大培养。通过qRT-PCR与Western blot技术来检测两种受体细胞中hPepT1 mRNA与蛋白的表达水平,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)对两种单克隆转染细胞的hPepT1典型底物甘氨酰肌氨酸(Glysar)摄取能力进行考察。结果 MDCK细胞与HeLa细胞转染后,hPepT1 mRNA与蛋白表达水平以及Glysar的摄取能力均明显高于其野生型细胞(P<0.05);虽然Glysar在HeLa细胞中的摄取量高于MDCK细胞,但MDCK-hPepT1细胞中hPepT1 mRNA与蛋白表达水平以及Glysar的摄取能力却高于HeLa-hPepT1细胞。结论在hPepT1稳定高表达转染细胞模型的构建中,为提高hPepT1的转染效率,从而获得更高效的转染细胞模型,以MDCK细胞作为转染的受体细胞可能是更为适宜的选择。
- 罗敏傅晓钟肖涛张文政李静陈雅刘亭
- 关键词：子宫颈癌细胞稳定转染BLOT
- 阿德福韦混膦酯衍生物体外代谢及稳定性研究被引量：5
- 2018年
- 采用超高效液相-飞行时间质谱仪(UPLC-QTOF-MS/MS)和超高效液相-三重四极杆质谱仪(UPLC-MS/MS)考察阿德福韦混膦酯衍生物阿德福韦单L-硫代异亮氨酸乙酯、去氧胆酸丙酯(Q3-I2)的稳定性及体外代谢产物,将Q_3-I_2和对照药阿德福韦酯与人工胃液、人工肠液、大鼠空白血浆和大鼠肝微粒体进行体外共孵育,采用UPLC-MS/MS和UPLC-QTOF-MS分别测定各孵育体系中的化合物剩余质量浓度和肝微粒体体系中的代谢产物,并通过底物消除法计算半衰期和清除率。化合物Q_3-I_2在胃肠道中稳定,延长了血浆、肝微粒体半衰期,同时能降解出活性代谢产物。在体外肝微粒体孵育体系中通过UPLC-QTOF-MS正负离子模式共检测到8种代谢产物,主要包括水解、氧化、乙酰化、葡萄糖醛酸化反应。
- 杨洋李静李静李韬肖涛
- 关键词：衍生物代谢UPLC-MS/MS
