刘金河
- 作品数：11 被引量：23H指数：4
- 供职机构：贵州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项贵州省科技厅社会发展攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 二氢杨梅素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2019年
- 目的:探讨二氢杨梅素(DMY)对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法:将肺癌A549细胞分为DMY组和对照组,DMY组分成5组,分别加入终浓度1、5、10、15及20mg/L的DMY,对照组加入等量DMSO;各组细胞培养72h时,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,计算DMY对A549细胞的半数致死量(IC50值);选取IC50值附近浓度的DMY处理细胞,分别在24、48及72h时,采用MTT检测细胞存活率;肺癌A549细胞分为DMY组(终浓度大约为IC50值的DMY)及对照组,细胞培养48h时,采用Hoechst33342/PI双染法结合倒置荧光显微镜检测细胞凋亡,DNAladder凝胶电泳检测细胞内DNA的断裂程度。结果:DMY能显著抑制A549细胞的增殖,细胞抑制率随着DMY浓度的增加逐渐增高(P<0.01),呈明显的浓度依赖性,IC50值为(13.16±0.098)mg/L;以15mg/LDMY处理A549细胞,细胞存活率随着时间的延长逐渐降低(P<0.01),呈明显的时间依赖性;15mg/LDMY孵育A549细胞48h,Hoechst33342/PI染色后荧光显微镜下细胞核内呈现强蓝光,说明细胞处于凋亡状态,DNAladder凝胶实验检测发现凋亡DNA片段明显增加,出现Ladder现象。结论:DMY能抑制肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡,可能与染色体DNA断裂有关。
- 刘金河葛章文张望明晏文涛刘志刘志
- 关键词：二氢杨梅素肺肿瘤细胞增殖
- 敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建
- 2018年
- 目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^(TM)核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。
- 黄晏军郑艺汤长宁刘金河刘杰麟
- 关键词：基因敲除MDA-MB-231细胞乳腺癌
- 二氢杨梅素对Bloom解旋酶结构和生物学活性的影响被引量：2
- 2019年
- 目的二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY),是一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗肿瘤等作用,研究DMY对Bloom解旋酶(Bloom helicase,BLM)生物学活性的影响对探索DMY的抗肿瘤机制具有重要意义。方法采用紫外光谱、圆二色谱、荧光偏振和自由磷检测等方法和技术研究DMY对BLM解旋酶的生物学活性的影响。结果圆二色谱和紫外光谱结果显示,DMY能与BLM解旋酶结合,且有1个结合位点;在0~25μmol·L^-1浓度范围内,DMY对BLM解旋酶的二级结构的干扰能力成正相关,在25~75μmol·L^-1浓度范围内则相反。荧光偏振和自由磷检测实验显示,DMY能结合在BLM解旋酶上,进而抑制BLM解旋酶的解链活性。结论DMY能够竞争性结合于BLM解旋酶的DNA结合位点上,改变BLM解旋酶的空间结构,从而抑制BLM解旋酶与DNA的结合,进而抑制BLM解旋酶的生物学活性。
- 刘金河张望明晏文涛许键炜许键炜
- 关键词：二氢杨梅素生化活性荧光偏振
- miR-26b调控Wnt/β-catenin信号通路促进成肝样分化MSCs迁移研究被引量：4
- 2020年
- 目的探讨miR-26b与Wnt/β-catenin信号通路、间充质干细胞(MSCs)不同分化状态的关系及其在MSCs向肝细胞生长因子(HGF)趋化迁移过程中的作用。方法以大鼠骨髓来源MSCs作为研究对象,用无血清诱导分化培养基分别培养0、7、14、21d,建立成肝样分化不同阶段的MSCs分化模型,qRT-PCR检测miR-26b在不同分化状态MSCs细胞中的表达;重组腺病毒(Ad-26b)感染MSCs实现miR-26b的高表达,并以空病毒感染MSCs为对照(Ad)后,检测细胞中信号分子active-β-catenin(ABC)、p-β-catenin、β-catenin的表达量以及Wnt/β-catenin经典靶基因c-Myc、RUNX2的转录水平,明确其对MSCs铺展面积和黏着斑的影响以及通过Transwell、Dunnchamber实验,比较其对不同分化状态MSCs趋化迁移的影响。结果随着诱导分化时间的延长,MSCs的miR-26b表达呈上升趋势,14d时,miR-26b的表达至高峰,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);Ad-26b组较Ad组ABC蛋白水平升高,p-β-catenin的蛋白水平下降,而β-catenin总蛋白无变化,Wnt/β-catenin信号下游靶基因c-Myc,RUNX2的表达上调。Ad-26b组高表达miR-26b后可促使MSCs铺展面积变小并呈现极性分布,MSCs细小黏着斑数目增加并向细胞前端周边分布。Transwell及Dunncham-ber实验表明MSCs诱导分化至7d,向HGF的趋化迁移能力高于诱导分化0、14和21d。高表达miR-26b组较Ad组细胞向HGF的趋化迁移能力较对照组增强(P<0.05)。结论miR-26b通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响MSCs的分化和趋化迁移。
- 吉杨丹罗红阳王丹王恒杨小燕何志旭刘金河刘金河赵锦张丽娟赵锦秦臻许键炜
- 关键词：间充质干细胞WNT/Β-CATENIN信号通路
- 汉防己甲素衍生物HL-22对BLM解旋酶生物学特性的影响被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨汉防己甲素衍生物HL-22对BLM^(642-1290)解旋酶生物学特性的影响。方法:采用荧光偏振法检测HL-22对BLM^(642-1290)解旋酶DNA结合活性和解链活性的影响,用孔雀绿-磷钼酸铵比色法检测HL-22对BLM^(642-1290)解旋酶ATPase活性的影响,采用紫外吸收光谱法检测HL-22对BLM^(642-1290)解旋酶构象的影响。结果:33.34μmol/L的HL-22对BLM解旋酶复性后双链DNA(ds DNA)结合活性的抑制率为49.07%、单链(ss DNA)结合活性的抑制率为50.00%,50μmol/L的HL-22对BLM解旋酶DNA解链活性的抑制率为93.58%,100μmol/L的HL-22对BLM解旋酶ATPase活性的抑制率为90.3%。结论:HL-22对BLM^(642-1290)解旋酶的DNA结合活性、解链活性和ATPase活性均有抑制作用。
- 张望明葛章文刘金河晏文涛潘卫东焦彦朝刘杰麟
- 关键词：结合活性ATPASE活性
- 汉防己甲素衍生物HL-49协同顺铂或多柔比星促进三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡被引量：4
- 2019年
- 目的:研究汉防己甲素衍生物HL-49协同顺铂(cisplatin,DDP)或多柔比星(adriamycin,ADM)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:用不同浓度的HL-49、DDP、ADM单药以及HL-49联合DDP或ADM处理MDA-MB-231细胞;采用MTT法检测细胞的增殖抑制率并计算Q值,平板克隆实验检测细胞的集落形成能力,FCM法检测细胞的凋亡率并计算Q值;蛋白质印迹法检测细胞中Bloom综合征解旋酶(Bloom’s symdrome helicase,BLM)、乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)和DNA修复关键酶Rad51以及凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 8、 caspase 10、Bax、p53和Bcl-2蛋白的表达水平。结果:与HL-49、DDP和ADM单药组相比,HL-49(1或2μmol/L)联合DDP(5或10μmol/L)或ADM(2或5μmol/L)组MDA-MB-231细胞的增殖抑制率均明显提高(P值均<0.05),其中HL-49联合DDP(单药浓度两两组合)4个浓度组的Q值分别为2.04、1.88、1.87和1.83,HL-49联合ADM的Q值分别为1.37、1.21、1.36和1.23,两药联用均具有协同效应。在平板克隆形成实验中,联合用药组细胞的集落形成数均较单药组明显减少(P值均<0.05)。HL-49(1或2μmol/L)联合DDP(5或10μmol/L)或ADM(2或5μmol/L)组MDA-MB-231细胞的凋亡率均高于单药组(P值均<0.05),其中HL-49联合DDP的Q值分别为1.20、1.35、1.70和2.06,HL-49联合ADM的Q值分别为1.48、1.17、1.99和2.13,提示两药联用有协同作用。HL-49联合DDP或ADM用药组MDA-MB-231细胞中的caspase 3、caspase 8、caspase 10和Bax蛋白的表达水平均较单药组明显上调(P值均<0.05),Rad51、BRCA1、BLM、p53和Bcl-2蛋白表达水平均明显下调(P值均<0.05)。结论:汉防己甲素衍生物HL-49与DDP或ADM联合用药均具有协同作用,且其联用抗肿瘤活性可能与诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡相关。
- 汤长宁吴翱兰刘金河刘金河杨爽何志旭何志旭
- 关键词：粉防己碱抗肿瘤联合化疗方案
- 汉防己甲素衍生物P-42对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨被引量：2
- 2016年
- 目的观察汉防己甲素(TET)衍生物P-42对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法收集对数生长期MDA-MB-435细胞,观察组分别加入不同浓度P-42,空白对照组加入DMEM培养液,培养24 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。收集对数生长期MDA-MB-435细胞,观察组分别加入终浓度2、10μmmol/L的P-42,对照组加入DMEM培养液,另设正常乳腺细胞MCF-10a为空白组,采用Western blot法检测各组细胞布卢姆综合征(BLM)蛋白。结果当P-42浓度在5、20、80μmmol/L时,MDA-MB-435细胞增殖抑制率分别为76.00%、84.77%和85.53%,20、80μmmol/L时细胞增殖抑制率均高于5μmmol/L时,P均<0.05;80μmmol/L时细胞增殖抑制率高于20μmmol/L时,但差异无统计学意义。观察组P-42浓度在2、10μmmol/L时,细胞早期凋亡率分别为39.47%、87.95%,晚期凋亡率分别为2.73%、3.82%,对照组分别为1.40%、0.90%,组间比较,P均<0.05。观察组P-42浓度在2、10μmmol/L时,BLM蛋白的相对表达量为31.57±7.80、33.82±8.61,对照组和空白组BLM蛋白相对表达量分别为12.73±1.14、19.12±1.58,组间比较,P均<0.05。结论 TET衍生物P-42可抑制MDA-MB-435细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与促进BLM蛋白表达有关。
- 晏文涛潘卫东刘柏岑吴翱兰刘金河刘杰麟
- 关键词：汉防己甲素乳腺癌细胞增殖
- 汉防己甲素衍生物HL-49对Bloom DNA解旋酶生物学特性的影响
- 2022年
- 目的汉防己甲素衍生物是一类双苄基异喹啉类化合物,具有明显的抗肿瘤活性。研究汉防己甲素衍生物HL-49对Bloom DNA解旋酶(bloom DNA helicase,BLM)构象和生物学活性的影响对于探索其抗肿瘤作用机制具有重要意义。方法采用紫外光谱扫描研究药物HL-49对BLM DNA解旋酶构象的影响,荧光偏振技术和孔雀绿-磷钼酸铵比色法分析HL-49对BLM解旋酶的DNA结合活性、DNA解链活性、ATPase活性。结果紫外光谱扫描结果显示,HL-49对BLM DNA解旋酶的三维构象影响不明显。荧光偏振法结果显示,HL-49对BLM解旋酶的DNA(dsDNA/ssDNA)结合活性的影响不明显,但随浓度的增加,与DNA相互结合的能力越强(P<0.01)。随着HL-49浓度的增加,BLM DNA解旋酶的DNA解链能力下降,K_(obs)值逐渐降低。孔雀绿-磷钼酸铵比色结果说明,随着HL-49浓度的增加或作用时间延长,HL-49能明显抑制BLM DNA解旋酶的ATPase活性。结论汉防己甲素衍生物HL-49通过与DNA的可逆性结合,抑制BLM DNA解旋酶的ATPase活性和DNA解链活性。
- 刘金河张望明晏文涛向天罗维杨凯琳徐泽权刘杰麟
- 关键词：生化活性荧光偏振
- 体外扩增的NK细胞运载溶瘤呼肠孤病毒对结直肠癌细胞的杀伤效应被引量：5
- 2019年
- 目的:评价体外扩增的人NK细胞能否作为呼肠孤病毒的运载细胞并探讨其临床转化应用价值。方法:体外扩增人NK细胞,用NK细胞装载呼肠孤病毒,激光共聚焦显微镜观察呼肠孤病毒与NK细胞结合的部位。NK细胞运载呼肠孤病毒(Reo-NK)到达肿瘤细胞后,CCK-8法检测在中和抗体的存在下病毒发挥的溶瘤作用;qPCR法检测肿瘤细胞内病毒RNA的相对表达量。CCK-8法检测Reo-NK对结直肠癌KRAS基因突变型(DLD-1)和野生型(CaCo-2、HT29)细胞株的杀伤效应,ELISA双抗体夹心法检测NK细胞释放的穿孔素水平。结果:呼肠孤病毒主要结合于NK细胞膜上,在人AB型血清的存在下体外扩增的NK细胞可将呼肠孤病毒传递到肿瘤细胞,且传递后的呼肠孤病毒仍具有显著溶瘤活性(P<0.01);同时检测到肿瘤细胞内病毒RNA的表达量显著增高(P<0.01)。与NK组相比,Reo-NK组对KRAS基因突变型和野生型结直肠癌细胞株的细胞毒作用均显著增强(P<0.05),穿孔素的释放均明显增加(P<0.05)。结论:体外扩增的人NK细胞适合作为呼肠孤病毒的运载细胞,且呼肠孤病毒能够增强NK细胞的细胞毒作用,两者联合后对结直肠癌细胞可发挥更强的杀伤作用,因而具有重要的临床转化应用价值。
- 陈晓庆王念雪龙世棋廖春香刘金河杨薇赵星
- 关键词：呼肠孤病毒自然杀伤细胞结直肠癌细胞
- 重点实验室在创新型医学本科人才培养中的实践被引量：4
- 2020年
- 结合贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心向本科生开放的模式,从高校重点实验室向本科生开放的基础、必要性,对培养学生实践能力和创新思维的意义,开放的方式以及取得的成效等方面探讨高校重点实验室向本科生开放在培养应用创新型医学人才中的作用。
- 许键炜杨小燕孙小霞王静娴刘金河刘金河
- 关键词：教学改革
