巫丹丹
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- HeLa细胞中ERK8突变基因的发现
- 2017年
- 目的:检测HeLa细胞中ERK8基因的表达并对其进行序列分析。方法:Westernblot检测HeLa细胞中ERK8蛋白的表达。提取HeLa细胞中的RNA,用RT-PCR方法得到ERK8基因片段,克隆后进行序列测定和分析。结果:首次发现HeLa细胞中存在ERK8基因突变:ERK8 S192P。结论:ERK8基因在HeLa细胞中的表达及其突变的发现,为进一步研究ERK8突变体在HeLa细胞中的功能研究奠定基础。
- 蔡娜丽杜纪英俞飞远巫丹丹刘道然许彦鸣
- 关键词：HELA细胞突变
- 重组人源MAPK15基因稳定表达细胞系的构建及其对肺癌细胞迁移的影响
- 2016年
- 目的:研究MAPK15基因对人肺癌H1299细胞迁移作用的影响。方法:将人源MAPK15克隆到真核表达系统中并通过脂质体法转染H1299;用含有Zeocin抗性的培养基进行筛选,挑取抗性细胞克隆扩大培养;Western blot检测MAPK15蛋白表达;通过划痕和Transwell实验研究MAPK15在H1299中细胞迁移率变化。结果:Western blot表明,挑取的抗性细胞克隆稳定表达MAPK15;划痕和Transwell实验结果显示,有MAPK15高表达的H1299中细胞迁移明显快于对照组。结论:在人肺癌H1299中,MAPK15高表达能促进细胞迁移,这为进一步阐明MAPK15在肺癌发生过程中所起的作用提供了一定的参考依据。
- 朱七五蔡娜丽巫丹丹刘道然许彦鸣
- 关键词：H1299细胞细胞迁移
- 核转录因子及其突变基因的克隆与GST融合蛋白的表达纯化及磷酸化活性的检测
- 2017年
- 目的:原核表达IκBα及IκBα(S32,36A)基因,纯化获得GST-IκBα及GST-IκBα(S32,36A)融合蛋白。方法:利用PCR扩增含有酶切位点EcoRⅠ及NotⅠ的IκBα基因,将其装入pGEX-5X-1原核表达载体中。通过点突变获得pGEX-5X-1-IκBα(S32,36A)质粒。将正确的重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达蛋白,再用Glutathione Sepharose 4B beads纯化GST融合蛋白,最后通过Western Blot鉴定纯化后的融合蛋白。结果:成功构建了pGEX-5X-1-IκBα及pGEX-5X-1-IκBα(S32,36A)原核表达载体。在37℃条件下,0.1mmol/L的IPTG能够诱导表达大量可溶性GST-IκBα与GST-IκBα(S32,36A)蛋白;纯化的融合蛋白可被抗IκBα的单克隆抗体特异性识别。最后通过体外激酶试验验证了IκBα能被HeLa细胞中存在的上游激酶所磷酸化,而第32,36位丝氨酸突变后IκBα不具有磷酸化活性。结论:纯化的GST-IκBα/IκBα(S32,36A)蛋白具有生物学活性,可用于后续的生物学研究。
- 蔡娜丽俞飞远巫丹丹臧中盛戴丽娟尧月赛留羊梁展羚刘道然许彦鸣
- 关键词：IΚBΑ原核表达蛋白纯化
- His-细胞外调节蛋白激酶8融合蛋白的表达与纯化
- 2015年
- 目的:对细胞外调节蛋白激酶(ERK)8进行表达、纯化及活性鉴定。方法:PCR扩增目的基因ERK8,进行Bam HⅠ和HindⅢ双酶切,与经Bam HⅠ和HindⅢ表达载体p ET-28a进行连接,转化大肠杆菌BL21,以不同浓度(0.2、0.4、0.8、1.0mmol/L)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和不同温度(15、20、25、37℃)对重组质粒进行诱导表达,并用Western blot技术鉴定表达的融合蛋白;用Ni2+金属螯合亲和层析柱法对融合蛋白进行纯化。结果:成功构建p ET-28a-ERK8重组质粒,并获得纯化的有活性的His-ERK8融合蛋白,且IPTG终浓度为0.2 mmol/L,温度37℃,时间5 h下,该融合蛋白的表达量最大。结论:通过对p ET-28a-ERK8的构建和ERK8蛋白表达与纯化,为进一步研究ERK8蛋白的结构和功能奠定实验基础。
- 巫丹丹蔡娜丽刘道然许彦鸣
