李益
- 作品数：4 被引量：63H指数：2
- 供职机构：湖南农业大学园艺园林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国际科技合作与交流专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用番茄果实特异启动子E8改造‘外源基因清除’的表达载体及转化金柑研究
- 2015年
- 利用"外源基因清除"技术(‘Gene-Deletor’),将外源基因从转基因金柑果实中彻底清除,可以达到用转基因作物生产出非转基因食品的目的。本研究利用引物pE8F和pE8R从樱桃番茄中克隆果实特异启动子E8,通过SalⅠ和SmaⅠ双酶切置换掉"外源基因清除"载体(pCambia-LF-polseed-FLP,简称Y-A)中的花粉、种子特异启动子PAB5,重新构造"外源基因清除"载体Y-A-E8,利用农杆菌EHA105介导转化实生态金柑,获得转化植株,并通过nptⅡ基因特异引物nptⅡ-F和nptⅡ-R PCR检测阳性转化植株。载体Y-A-E8 SalⅠ和SmaⅠ双酶切结果表明,E8启动子成功替换启动子PAB5,Y-A-E8经EHA105介导转化成功获得11株转化植株且PCR检测到6株为Y-A-E8转基因植株。研究结果可为"外源基因清除"技术在转基因金柑方面的应用提供参考。
- 谢玉明李益严佳文姚润贤Alessandra Gentile邓子牛
- 关键词：金柑
- 柑橘品种鉴定的SSR标记开发和指纹图谱库构建被引量：60
- 2018年
- 【目的】筛选出一套SSR核心引物,用于构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,为柑橘种苗认证、品种登记和植物新品种保护提供技术支撑。【方法】以柑橘属8个主要栽培种类为试材进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,筛选出多态性丰富、扩增条带稳定的引物对部分参试品种进行PCR扩增,扩增产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行进一步的引物筛选;筛选得到的引物进行荧光标记,并选用部分柑橘品种进行PCR扩增,扩增产物利用基因分析仪检测,分别计算各引物的PIC值、等位基因数目,选取一套多态性丰富的适合进行荧光毛细管电泳检测的SSR引物组合,进而对所有参试品种进行分析,构建柑橘品种的DNA指纹图谱库,同时利用筛选的SSR标记对参试品种进行鉴定。【结果】初期以柑橘属8个种的代表品种(太田椪柑、沙田柚、沅江酸橙、大红甜橙、邓肯葡萄柚、枸橼、费米耐劳柠檬和墨西哥来檬)为材料,用362对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经4%琼脂糖凝胶电泳检测,初步筛选出80对种间多态性高、扩增稳定的SSR引物;进一步从8个种类里选择不同类型的64个柑橘品种,用上述筛选出的80对SSR引物进行PCR扩增,扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,再筛选出60对品种类型间多态性高、扩增稳定、条带清晰的SSR引物,并分别进行荧光标记;另以168份柑橘品种为材料对上述60对SSR引物进行PCR扩增,经荧光毛细管电泳检测,依据各引物的PIC值、等位基因数目、峰图读取难易程度、扩增稳定性及染色体位置等,最终筛选出21对SSR引物作为指纹图谱库构建的核心引物。为消除不同仪器、不同试验批次等引起的误差,为21对SSR引物各主要等位变异选择相应的参照品种。根据各引物标记的荧光颜色及扩增片段大小进行合理组合,21对SSR引物可分成5组进行多重电泳,共采集500份柑橘品种的DN
- 李益马先锋唐浩李娜江东龙桂友李大志牛英韩瑞玺邓子牛
- 关键词：柑橘SSR毛细管电泳
- 枳砧优系的快速繁殖技术研究被引量：2
- 2017年
- 为将柑橘砧木枳(Poncirus trifoliata(L.)Raf.)的优良单系快速繁殖成遗传背景一致的群体,以大田一号枳优系试管播种实生苗为外植体,进行组织培养快速繁殖研究。结果表明,枳试管播种后暗培养30 d后获得的上胚轴,是较合适的快速繁殖材料。上胚轴节间茎段长度为9 mm、于MT+1 mg/L BA条件下培养时,再生率、再生系数较高。MT+1 mg/L BA有利于上胚轴单芽插条萌芽。MT+0.5 mg/L BA+0.05 mg/L IBA较适合芽增殖,增殖系数可达4.98。1/2 MT+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L IBA+0.6 g/L生物炭的培养条件下,试管苗生根情况最佳,移栽到草炭∶河沙∶锯木屑=1∶2∶1的基质中成活率达79.5%。通过以上流程,可在5个月内实现从种子到植株成活的过程,目前获得129株可供嫁接的枳快速植株。
- 汤丹李益张凤龙桂友邓子牛
- 关键词：柑橘砧木快速繁殖
- 利用EMS诱变获得抗溃疡病甜橙突变体的研究被引量：1
- 2015年
- 研究以大红甜橙实生苗上胚轴为试材,采用甲基磺酸乙酯(EMS)对其节间茎段进行诱变处理,通过用不同浓度溃疡病菌粗提物进行离体筛选,以确定适宜的抗溃疡病选择压,并获得抗溃疡病突变体材料。结果表明,以1.8%的EMS溶液浸泡节间茎段2 h可获得"半致死"效应;溃疡病菌粗提物浓度为4%时为适宜的抗病选择压。对1 030个再生不定芽进行两次不连续离体筛选,再经离体接种溃疡病菌鉴定后获得35个抗性芽,成活率为3.4%。该试验初步获得抗溃疡病粗提物的大红甜橙突变体株系23株,为后续进一步研究提供材料基础。
- 罗丽李益葛红娟谢玉明邓子牛
- 关键词：柑橘溃疡病甲基磺酸乙酯抗病突变体离体筛选
