王欣宇
- 作品数：11 被引量：19H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”“十二五”国家科技计划农村领域黑龙江省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪整合素β3多克隆抗体制备与鉴定
- 2016年
- 为了制备猪整合素β3多克隆抗体,试验利用大肠杆菌原核表达系统,对密码子优化的猪整合素β3基因主要抗原区进行原核表达,表达的重组蛋白纯化后,免疫Balb/c雌性小鼠,采血后分离血清,进一步通过ELISA和Western-blot对制备的猪整合素β3多克隆抗体进行鉴定。结果表明:猪整合素β3基因主要抗原区获得了成功表达,表达蛋白分子质量为102 ku左右,以纯化重组蛋白作为免疫原制备的多克隆抗体效价为1∶12 800,且能识别天然猪整合素β3。
- 高晶王志慧郭东华李春秋苏明俊王欣宇赵喜文王恩雨魏姗刘秋瑾孙东波
- 关键词：整合素Β3原核表达重组蛋白多克隆抗体病毒受体病毒感染
- 奶牛腐蹄病坏死杆菌分离鉴定及白细胞毒素基因lktA1序列分析被引量：3
- 2015年
- 为分离纯化奶牛腐蹄病坏死杆菌,分析其与其他菌株的亲缘关系,本研究利用坏死杆菌白细胞毒素特异性引物,对奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品进行了PCR检测,利用厌氧培养基对PCR检测阳性样品进行了坏死杆菌的分离培养,以分离的坏死杆菌基因组DNA为模板,对白细胞毒素基因进行了克隆和序列分析。结果显示,9份奶牛腐蹄病病牛蹄部拭子样品PCR检测结果均为阳性,对其中一份样品中的坏死杆菌进行分离培养,获得了纯培养物,命名为bFR13-1。坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素基因测序结果显示,与GenBank已发表的H05、A25和B35菌株的白细胞毒素基因在核苷酸水平的同源性分别为98.40%、98.35%和90.79%,推导氨基酸的同源性分别为97.7%、97.6%和89.0%。进化树分析结果显示,坏死杆菌bFR13-1菌株白细胞毒素与H05菌株的同源性最高,bFR13-1菌株与H05菌株和A25菌株呈较近亲缘关系。结果表明,不同坏死杆菌分离株的白细胞毒素呈现一定的变异性,这种变化是否与坏死杆菌致病性相关,值得深入研究。
- 高晶李春秋姚爽张立春王欣宇王志慧赵喜文魏姗王恩雨孙东波武瑞郭东华
- 关键词：奶牛腐蹄病坏死杆菌
- 2015—2016年黑龙江三个地区猫冠状病毒N基因分子流行病学调查被引量：7
- 2018年
- 为了明确2015—2016年黑龙江三个地区猫传染性腹膜炎（FIP）病例中猫冠状病毒（FCoV）的流行情况,试验在黑龙江哈尔滨、大庆和齐齐哈尔地区采集26份经临床初步诊断患FIP的猫腹水样品,应用巢式RT-PCR技术对FCoV N基因进行扩增,对阳性样品进行序列分析、构建血清型和生物型遗传进化树。结果表明：巢式RT-PCR扩增出24份阳性样品,FCoV阳性率为92.31%（24/26）。24个FCoV毒株N基因序列分析显示,核苷酸序列同源性为89.0%~100%,推导氨基酸序列同源性为89.6%~100%。N基因血清型遗传进化树分析显示,23株属于FCoV-Ⅰ群,其中8株属于FCoV-Ⅰa亚群,15株形成一个独立的FCoV-Ⅰb亚群;1株属于FCoV-Ⅱ群,并与5个美国参考毒株及1个匈牙利参考毒株具有较近的亲缘关系。N基因生物型遗传进化树分析显示,24株属于FIPV生物型,其中18株形成一个单独FIPV亚群,与日本UCD1株亲缘关系较近,与美国参考毒株和匈牙利参考毒株亲缘关系较远。说明在黑龙江哈尔滨、大庆和齐齐哈尔地区阳性渗出型FIP病例中,主要以FCoV-Ⅰ型毒株感染为主。
- 刘秋瑾孙东波王欣宇李春秋武瑞郭东华
- 关键词：分子流行病学N基因遗传进化
- 犬肠道冠状病毒基因型和重组的研究进展
- 2016年
- 犬肠道冠状病毒(CCoV)与猪传染性胃肠炎病毒、猫冠状病毒同属于冠状病毒科、冠状病毒属、α-冠状病毒-1成员。CCoV感染一般引起幼龄犬发生非致死性的轻度腹泻,呈现高发病率、低死亡率的特点,当与其他肠道病原混合感染时,能导致患病动物高的死亡率。近年来,随着CCoV高致病性的变异毒株在欧洲国家陆续报道,该病再一次引起了广泛的关注。为了增加对CCoV近年来遗传进化的了解,对CCoV基因型和重组研究进展做了综述,为CCoV的深入研究提供参考。
- 王欣宇孙东波
- 关键词：犬冠状病毒基因型
- 猪干扰素α-1基因的原核表达与多克隆抗体制备被引量：3
- 2014年
- [目的]利用大肠杆菌原核表达系统对猪干扰素α-1(Po IFNα-1)基因进行表达,制备Po IFNα-1重组蛋白多克隆抗体。[方法]根据Gen Bank发表的Po IFNα-1核苷酸序列,合成密码子优化的Po IFNα-1基因,构建Po IFNα-1基因的p ET-28a原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌后,利用IPTG进行诱导表达。表达的Po IFNα-1重组蛋白纯化后,免疫昆明系小鼠,制备多克隆抗体。采用Western blot技术检测Po IFNα-1重组蛋白的多克隆抗体与天然Po IFNα-1的反应性。[结果]合成的Po IFNα-1基因在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中成功表达,针对Po IFNα-1重组蛋白的多克隆抗体能够识别天然的猪干扰素α-1。[结论]合成的Po IFNα-1基因在大肠杆菌中获得了成功表达,为后续研究奠定了基础。
- 刘娜李春秋高晶耿雨菲王欣宇苏明俊魏姗王志慧王建发武瑞孙东波
- 关键词：原核表达抗体制备
- 2014—2015年黑龙江省牡丹江地区犬细小病毒2型分子流行病学调查被引量：2
- 2015年
- 为了调查黑龙江省牡丹江地区犬细小病毒(CPV-2)流行情况,利用基于CPV-2部分VP2基因(568 bp)PCR的方法,对2014年5月—2015年4月收集的40份腹泻犬粪便拭子进行了检测与分析。结果显示,在40份样品中,20份样品为CPV-2阳性(50%),其中,新CPV-2a(Ser297Ala)型和CPV-2c型分为别占75%(15/20)和25%(5/20);序列分析结果显示,20个CPV-2毒株VP2基因的核苷酸和氨基酸的相似性分别为98.6%~100%和98.2%~100%;进化树分析表明,与其他国家CPV-2参考毒株相比,鉴定的新CPV-2a型毒株和CPV-2c型毒株与中国CPV-2参考毒株形成一个进化群(A),其中鉴定的新CPV-2a型毒株分布于不同的分支中。结果提示,CPV-2在牡丹江地区犬腹泻病例中呈现高感染率。
- 耿雨菲王恩雨滕井胜李春秋姚爽王志慧王欣宇苏明俊魏姗赵喜文孙筱璇边秀东张立春孙东波
- 关键词：腹泻VP2基因分子流行病学
- 不同程度跛行奶牛血浆中E_2、GnRH、FSH和PGF2a的检测与分析被引量：1
- 2015年
- 为研究跛行对产后奶牛主要生殖激素的影响,实验采用5分制跛行评价标准,在黑龙江地区某规模化牧场,对产后40 d泌乳牛（未使用任何生殖激素类药物）进行跛行评分,然后对跛行评分为1~5分奶牛血浆样品中的促性腺激素释放激素（Gn RH）、促卵泡生长激素（FSH）、雌二醇（E2）和前列腺素（PGF2a）含量进行测定,分析不同跛行评分奶牛血浆样品中4种激素的变化。共获得49头泌乳奶牛作为研究对象,其中1分为8头,2分为19头,3分为14头,4分为4头,5分为4头。研究结果显示,与健康奶牛相比,随着跛行评分的增加,E2、Gn RH、FSH和PGF2a的含量均呈现不同程度的减少趋势。研究结果提示,跛行能影响奶牛产后主要的生殖激素分泌。
- 谷城蒋庆余王欣宇高晶李春秋魏姗王志慧王建发曲永利武瑞孙东波
- 关键词：跛行激素产后
- 犬肠道冠状病毒基因型和重组的研究进展
- <正>犬肠道冠状病(Canine cornonavirus,CCoV)属于冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)、α-冠状病毒-1种(Alphacoronavirus-1)成员,是...
- 王欣宇孙东波
- 关键词：基因型基因重组
- 文献传递
- 2014—2015年黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒M基因分子流行病学调查被引量：4
- 2016年
- 为调查黑龙江省哈尔滨地区犬冠状病毒（CCo V）的流行情况,本研究通过RT-PCR对141份腹泻犬粪便拭子样品中CCo V M基因片段（409 bp）进行了扩增,进一步对M基因进行了测序和分子进化性分析。结果表明：在141份样品中,38份样品为CCo V阳性（26.95%,38/141）,其中CCo V-Ⅰ型和CCo V-Ⅱ型分别占13.16%（5/38）和86.84%（33/38）。M基因序列分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株M基因序列的核苷酸同源性为95.7%~99.1%,推导的氨基酸序列同源性为97.4%~100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株M基因序列的核苷酸同源性为97.4%~100%,推导的氨基酸序列同源性为100%;33个CCo V-Ⅱ型毒株与中国参考毒株HF3的核苷酸同源性为88.7%~96.2%,推导的氨基酸序列同源性为92.2%~97.4%。进化树分析表明：5个CCo V-Ⅰ型毒株与2个巴西参考毒株呈现出较近的亲缘关系;33个CCo V-Ⅱ型毒株形成五个亚群,与中国参考毒株（除NJ17毒株）和国外参考毒株表现出较远的亲缘关系。可见CCo V在犬腹泻中呈现出较高感染率,以CCo V-Ⅱ型毒株感染为主,并表现出遗传多样性。
- 王欣宇王福军辛科睿魏姗王恩雨郜洪泉王志慧邢宇昕赵喜文孙筱璇边秀东刘秋瑾孙东波
- 关键词：M基因流行病学
- 变形蹄奶牛血清shotgun蛋白质组学分析
- 2016年
- 为了揭示变形蹄奶牛血清蛋白表达谱,探索奶牛变形蹄发生的机制,试验利用鸟枪法(shotgun)蛋白质组学技术分别对健康奶牛(UA,n=26)和变形蹄奶牛(HD,n=40)的混合血清样品进行了鉴定和生物信息学分析,进一步分析UA和HD样品的差异蛋白,并对选择的差异蛋白进行验证。结果表明:在UA样品中鉴定了393个蛋白,其中224个蛋白为高度可信蛋白;在HD样品中鉴定了409个蛋白,其中225个蛋白为高度可信蛋白。UA和HD样品中鉴定的蛋白,在分子功能、细胞进程和细胞成分分类中显示出明显的差别。在UA和HD样品中存在着24个潜在的差异蛋白,其中18个蛋白来自HD样品,6个蛋白来自UA样品;在HD样品潜在的差异蛋白中,桥粒蛋白(desmoplakin)、连接桥粒斑珠蛋白(junction plakoglobin)和钙磷脂结合蛋白A2(annexin A2)与奶牛变形蹄发生具有潜在的相关性。通过ELISA或Western-blot对UA和HD样品中的免疫球蛋白(Ig G)、牛结合珠蛋白(Bo Hp)、补体C4和补体C8进行了验证,说明变形蹄奶牛血清蛋白表达谱发生了变化。
- 赵喜文郭东华谷城曲永利王欣宇苏明俊魏姗王恩雨王志慧刘秋瑾辛科睿武瑞孙东波
- 关键词：奶牛变形蹄血清蛋白质组学差异蛋白
