王玉国
- 作品数：6 被引量：20H指数：2
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省高校科技创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪白细胞介素18基因的克隆及真核表达重组质粒的构建
- 2017年
- 为获得表达猪白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的真核表达重组质粒,试验通过RT-PCR从猪脾脏、肺脏和淋巴结组织中扩增猪IL-18全基因并定向克隆到真核表达载体pZJ-1,测序分析和酶切鉴定正确后,转染至293T细胞中,并通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别在基因和蛋白水平检测IL-18的表达。结果表明,试验成功构建了真核表达重组质粒pZJ-IL-18,且可以在293T细胞中表达IL-18基因。Western blotting试验证实,猪IL-18多克隆抗体能与约17ku的表达产物发生特异性反应,表明IL-18能正确表达且具有反应原性。本试验构建了表达猪IL-18基因的真核表达质粒,并在293T细胞中瞬时表达,为进一步研究IL-18的功能奠定基础。
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- 关键词：IL-18基因真核表达载体克隆
- 猪ISG15基因的克隆表达与多克隆抗体的制备
- 2017年
- 本研究从家猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR克隆出家猪ISG 15基因,经测序和序列分析,将ISG 15片段与p ET28a质粒连接,构建重组原核表达载体p ET28a-ISG15;经IPTG诱导表达后,通过Ni柱纯化,以获得ISG15蛋白。用纯化的ISG15蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果显示,家猪ISG 15基因CD S区长504 bp,编码167个氨基酸,包括两个泛素样结构域(N端第3~75位和C端第81~156位氨基酸肽段)及C末端保守序列为LRLRGG;W estern-blot分析表明重组ISG15蛋白的免疫原性良好;经ELISA测定血清中抗体的效价为1∶102 400。上述研究结果为进一步揭示家猪ISG15蛋白的功能奠定了基础。
- 李双双李新果石昂时庆贺杨利王玉国陈陆李永涛王川庆
- 关键词：蛋白表达多克隆抗体
- PRV感染PK-15细胞对prv-miR-LLT11a表达时相的影响
- 2017年
- 为研究伪狂犬病病毒(PRV)的致病机制,将PRV QBA株按0.5个感染复数(MOI)的剂量接种PK-15细胞,分别在感染后0、1、2、4、6、8、12、24 h收取细胞并提取microRNA(miRNA),采用茎环引物实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测prv-miR-LLT11a的表达时相。RT-q PCR扩增结果显示,熔解曲线峰值单一,扩增曲线拐点清晰。RT-q PCR检测结果表明,PRV QBA株感染PK-15细胞1 h后,prv-miR-LLT11a表达量极显著升高,随后表达量下调,在感染6 h后表达量降至最低,感染8 h后表达量持续急剧升高。
- 杨利石昂李新果李双双时庆贺郑关民王玉国陈陆王川庆
- 关键词：伪狂犬病病毒PCR
- 河南省2016-2017年致病性猪圆环病毒遗传演化分析被引量：8
- 2018年
- 采集了2016—2017年间不同地区临床疑似圆环病毒病病例样本65份，提取病毒核酸后，分别用PCV2和PCV3特异性引物进行PCR扩增，鉴定出PCV2阳性样品43份，阳性率为66．15％；PCV3阳性样品3份，阳性率为4．61％。选取其中13份PCV2阳性样品和3份PCV3阳性样品进行ORF2基因克隆、测序和进化分析。结果显示：河南省PCV2和PCV3流行毒株ORF2基因序列主要存在是单个碱基突变，没有缺失或插入。进化树分析显示，PCV2流行毒株均处于2b和2d2个基因群，其中7份属于2b型，6份属于2d型，2016年和2017年PCV2基因型并没有明显差别；3份PCV3阳性样品中KF-PCV3、AY—PCV3处于一个分支，SX-PCV3与MF589108形成一个分支。结果表明：2016—2017年间河南省感染和流行的PCV2主要为2b和2d2个基因群，表现出遗传进化稳定性，部分地区出现PCV3感染的情况。
- 时庆贺石昂李新果王玉国史志斌张磊陈陆
- 关键词：猪圆环病毒PCV2ORF2基因遗传演化分析
- 副猪嗜血杆菌河南流行株的分离鉴定及分型被引量：12
- 2018年
- 为了解河南省副猪嗜血杆菌病的流行情况,对2017—2018年采自河南省不同地区的45份疑似病料,进行细菌分离及形态学观察、培养特征鉴定、PCR鉴定及分型。结果显示,共分离鉴定出12株副猪嗜血杆菌,血清型为1、2、4、5、7、13型和不可分型。其中,血清型1型2株,分别命名为XX-3、HB-1;血清型2型1株,命名为XX-4;血清型4型1株,命名为ZJ-1;血清型5型4株,分别命名为LY-1、DF-1、XX-2、KF-1;血清型7型2株,分别命名为SQ-2、XX-1;血清型13型1株,命名为NY-1;还有1株不可分型,命名为SQ-1。可见,河南省存在多个副猪嗜血杆菌血清型,且不同地区血清型不一致,1、5、7型为优势血清型。
- 李新果史志斌张磊赵小月王玉国石昂时庆贺陈陆
- 关键词：副猪嗜血杆菌
- 共表达膜蛋白GP5、M与猪IL-18基因猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸疫苗的构建及免疫效力研究
- 引言为了构建有效预防猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的核酸疫苗,本研究选择与PRRSV中和抗体产生相关的膜蛋白GP5、M作为构建核酸疫苗的免疫原基因,将GP5、M、修饰型的GP5 (GP5m)及猪白细胞介素18基因(IL-...
- 石昂时庆贺李新果王玉国陈陆
