朱琦
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：贵州省优秀科技教育人才省长资金项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 稳定携带山羊痘病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建被引量：2
- 2011年
- 为构建质粒稳定型山羊痘DNA疫苗,采用PCR与限制性酶切技术去除真核表达质粒pcDNA3.1(+)的氨苄抗性bla基因启动子序列,构建改良质粒pmcDNA3.1(+),然后插入山羊痘病毒P32基因,获得重组表达质粒pmcDNA3.1-P32,通过TSS法将其转化至减毒沙门氏菌中,构建成功携带山羊痘DNA疫苗的重组减毒沙门氏菌SL7207(pmcDNA3.1-P32);体内和体外试验结果表明,重组质粒pmcDNA3.1-P32在沙门氏菌中的稳定性显著高于pcDNA3.1-P32。这为下一步减毒沙门氏菌介导的山羊痘DNA免疫研究奠定了基础。
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- 关键词：减毒沙门氏菌山羊痘疫苗
- 大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2010年
- 为探索减毒胞内侵袭菌介导的粘膜免疫对宿主动物胃肠道微生态的影响,以大肠杆菌与葡萄球菌16S rRNA基因拷贝数为研究对象,采用实时定量技术(Real-time PCR)对2种细菌进行定量检测,建立大肠杆菌与葡萄球菌数量快速检测方法。结果表明:扩增出的2种细菌核苷酸序列与GenBank上已知目的菌种同源性为100%,构建的2条标准曲线相关系数均接近1,误差较小,熔解曲线显示均成单一峰值。成功构建了大肠杆菌与葡萄球菌实时定量PCR标准曲线,可为进一步研究减毒沙门氏菌介导的粘膜免疫奠定基础。
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- 关键词：粘膜免疫大肠杆菌葡萄球菌REAL-TIMEPCR
- 山羊痘口服疫苗构建及其安全性、稳定性检测被引量：1
- 2010年
- 目的:探索山羊痘新型疫苗。方法:将山羊痘病毒P32基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),转化至减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207(aroA-);重组菌以不同浓度灌服小鼠进行安全性检测,同时进行稳定性检测。结果:重组减毒沙门氏菌质粒PCR鉴定与预期大小(986bp、1 134bp)一致,完成山羊痘口服疫苗构建;安全性试验结果表明除1010CFU剂量组小鼠呈现轻微反应外,其它组别小鼠均健康存活;体外连续培养10代菌能检测到目的基因,以109CFU剂量灌服小鼠,在第1d、第3d肠内容物和第5d脾脏中分离到重组菌。结论:成功构建了以减毒沙门氏菌为载体的山羊痘口服疫苗,且具有良好的安全性和稳定性,为山羊痘新型疫苗的进一步深入研究奠定了基础。
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- 关键词：山羊痘减毒沙门氏菌疫苗
- 3种瘤胃纤维分解菌实时定量PCR方法的建立被引量：4
- 2010年
- 为探索以减毒胞内侵袭菌介导的黏膜免疫对宿主动物胃肠道微生态的影响,本试验以白色瘤胃球菌、黄化瘤胃球菌和产琥珀酸丝状杆菌3种主要瘤胃纤维分解菌16SrRNA分别设计引物,以山羊瘤胃液提取细菌总DNA,分别扩增3种纤维分解菌目的DNA片段,并连接至pMD-18TVector上,经PCR和测序鉴定后,以不同稀释度的重组质粒为模板进行荧光定量PCR反应。结果显示,扩增得到的3种瘤胃纤维分解菌目的片段与已知菌种相应片段的同源性大于99%;以不同稀释度重组pMD-18T为模板建立的荧光定量PCR扩增曲线差异明显,绘制标准曲线的相关系数均接近1,熔解曲线均呈单一峰值。因此,本试验成功建立了3种瘤胃主要纤维分解菌的实时定量PCR方法,为减毒胞内侵袭菌介导的黏膜免疫研究奠定了基础。
- 尹传宝陈俊朱琦程振涛周碧君文明
- 关键词：REAL-TIMEPCR
