王丹丹
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp15的体外表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2016年
- 以实验室保存的肾型传染性支气管炎病毒(IBV)毒株SC021202作为模板,扩增IBV非结构蛋白nsp15基因后,成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-nsp15,将其转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达出约45ku的目的蛋白。纯化的nsp15蛋白可与IBV感染鸡血清发生良好反应。用纯化的重组nsp15蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体。经过3轮有限稀释和筛选阳性克隆,最终获得3株稳定分泌nsp15蛋白抗体的细胞株,分别为1A6、2B6和4D7。Western-blot分析显示,3株单克隆抗体都与nsp15蛋白有很好的特异性反应。IFA检测显示,nsp15单克隆抗体与IBV感染的细胞和nsp15基因转染的细胞均出现明显的反应。IBV nsp15单克隆抗体的制备为传染性支气管炎流行病学的监测、鉴别诊断及对其蛋白功能的进一步研究奠定了基础。
- 李乐超石婷婷郎咸勇牟小东王丹丹周继勇廖敏
- 关键词：传染性支气管炎病毒单克隆抗体
- 禽坦布苏病毒截短E蛋白单克隆抗体的制备及其抗原性分析被引量：1
- 2016年
- 为制备禽坦布苏病毒囊膜E蛋白截短蛋白的单克隆抗体并分析其抗原性,以坦布苏病毒YY1分离株的cDNA为模板,通过RT-PCR扩增编码截短E蛋白的基因,并将其成功克隆到原核表达载体pET-28a(+)中。重组载体pET-28a(+)-YY1E转化的大肠杆菌BL21(pLysS)在IPTG诱导下高效表达重组蛋白His-YY1E,该蛋白可与坦布苏病毒感染鸭的血清反应。用纯化的His-YY1E免疫小鼠制备单克隆抗体,采用有限稀释法经过3轮筛选和鉴定最终获得了2株分泌抗E蛋白的单克隆抗体细胞株1C5和3B11。制备的单克隆抗体与原核表达和病毒感染细胞中的E蛋白均能反应。进一步通过转染截短蛋白E不同区域截短体与pEGFP-C3构建的重组载体,并经IFA检测,发现单克隆抗体1C5和3B11识别的截短E抗原区域位于C端35个氨基酸(105个碱基)之间。本研究为进一步研究坦布苏病毒E蛋白的功能,研制坦布苏病毒病亚单位疫苗以及建立快速特异的坦布苏病毒检测方法奠定了基础。
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- 关键词：单克隆抗体抗原性
