王秀东
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划吉林市科技发展计划项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 坏死梭杆菌白细胞毒素基因SH片段的克隆与表达被引量：1
- 2009年
- 坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因(lkt)是其编码基因。以分离到的国内牛源坏死梭杆菌FN(A)菌株F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增白细胞毒素基因SH片段,克隆至pMD18-T载体上,以BamHⅠ和HindⅢ酶切的目的片段SH与相应酶切的pET32a载体连接构建pET32a-SH重组表达质粒,经转化E coli BL21(DE3)后用IPTG进行蛋白诱导,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况。结果表明:扩增基因序列大小为1800bp,SDS-PAGE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2kDa的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经West-ern-blot证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性。
- 赵利芳陈立志张秀华冯书章王克坚刘晓颖陆伟冯凯王秀东姚志利
- 关键词：坏死梭杆菌克隆
- 犬细小病毒BJ5株分离和VP2序列分析被引量：4
- 2009年
- 从北京地区疑似犬细小病毒感染的病死犬血样粪便中分离1株犬细小病毒并进行VP2基因扩增和序列分析,命名为CPV-BJ5株。应用CrFK细胞分离病毒,经2次传代后出现稳定的血凝特性(HA);免疫荧光试验表明,感染分离毒的细胞与抗CPV单克隆抗体反应并出现特异性的胞浆荧光;试验犬接种分离病毒后14d内均表现为体温升高、食欲减退、腹泻及血便等典型发病症状;序列测定结果表明分离病毒的VP2基因与CPV-15、CPV-020、CPV-NJ、CPV-HLJ-JQ株的核苷酸相似性分别为99.2%、99.5%、99.1%、99.9%,氨基酸相似性分别为99.5%、100%、100%、99.3%;与CPV-Northern、CPV-39株的VP2基因核苷酸相似性为98.9%、98.1%,氨基酸相似性为98.8%、99.5%。表明该分离病毒与CPV-15、CPV-020、CPV-NJ、CPV-HLJ-JQ株在基因型上同属于CPV-2a毒株。
- 王洪林谭斌陈微晶王秀东武华
- 关键词：犬细小病毒
- 致病性犬瘟热病毒CDV-JT1株的分离与鉴定被引量：2
- 2010年
- 应用MDCK细胞从吉林某地犬瘟热（Canine distemper,CD）疑似发病犬肺脏组织中分离出1株病毒,该分离毒株经MDCK细胞传至第6代时出现典型的合胞体细胞病变（CPE）。经病毒形态观察、理化特性鉴定、RT-PCR和直接免疫荧光鉴定可知该分离毒株为犬瘟热病毒（CDV）,命名为CDV-JT1;动物试验表明,试验犬接种CDV-JT1后21 d内都出现典型的犬瘟热症状;H基因序列分析表明,CDV-JT1株的H基因与中国分离株CDTaiChung株、TN株、SHLJ（07）1株、日本Hamamatsu株、Ueno株、Yanaka株和KDK-1株在基因型上同属于Asia-1型。CDV-JT1株含有包括CDV野毒株特有的309~311位在内的8个潜在的N-连接天冬酰氨糖基化位点。CDV-JT1强毒株的分离成功,对进一步开展疫苗研发、流行病学调查以及致病机理等方面的研究具有重要意义。
- 王秀东谭斌陈微晶陈立志武华
- 关键词：犬瘟热病毒强毒株H基因
- 一株H1N1亚型猪流感病毒的分离鉴定及全基因序列分析被引量：2
- 2010年
- 2006年从辽宁省某猪场采集具有流感症状猪鼻拭子共30份,经9~11日龄SPF鸡胚分离,对分离株进行了血凝试验、血凝抑制试验、RT-PCR亚型鉴定,全基因序列比对和接种试验动物试验。结果表明：该毒株具有凝集0.5%鸡红细胞的活性,且与抗猪流感H1标准血清发生血凝抑制反应,RT-PCR分别扩增得到全基因8个片段,利用DNAStar生物学软件进行序列分析,HA基因与GenBank登录的H1~H16中的H1基因序列同源性最高,NA基因与N1~N9中的N1基因序列同源性最高,故该LN株分离毒为猪流感H1N1亚型病毒。全基因序列中,除了M基因不是猪源的,其它基因片段均与国内H1N1亚型猪流感参照株高度同源,推测LN株可能是由类人和类禽谱系的流感病毒与古典猪谱系的流感病毒重排形成的;用该病毒接种试验动物可成功复制出猪流感典型症状。该病毒的分离鉴定及全基因组序列分析为我国进一步调查猪流感的流行规律提供了基础数据。
- 路伟张秀华王秀东武华
- 关键词：猪流感病毒H1N1
