赵小龙
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
- 供职机构：武汉轻工大学生物与制药工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家中医药管理局度中医药行业科研专项湖北省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：生物学化学工程农业科学更多>>
- 茯苓原生质体制备与再生条件的优化被引量：5
- 2015年
- 对茯苓原生质体形成与再生条件进行研究。分别从菌丝菌龄、酶种类及浓度、酶解时间、酶解温度4个方面优化了原生质体的制备条件,从再生培养基的成分、原生质体涂布方法、酶解时间3个方面优化原生质体的再生条件。结果表明:采用培养6天的茯苓菌丝,在3.5%溶壁酶+1%崩溃酶的混合酶液中,36℃酶解2.5—3 h,获得的原生质体产量最高,可达到39.38×107个/g,双层涂布再生率可达32.7%。
- 汪琪赵小龙陈平
- 关键词：茯苓原生质体
- 茯苓β-tubulin基因实时荧光定量PCR体系的建立和评估被引量：1
- 2016年
- 旨在以不同生长时期茯苓为材料,β-tubulin基因为内参基因,建立实时荧光定量PCR体系。根据Gen Bank上同为真菌的黄曲霉菌β-tubulin基因保守区域设计内参引物,以茯苓菌丝体、初期菌核和成熟期菌核c DNA为模版,检测内参引物的特异性和稳定性;并对PCR反应体系中的引物浓度和模板浓度进行优化;最后利用茯苓转录组数据中6个显著差异表达基因对优化后的反应体系进行表达分析与验证。结果显示,综合扩增曲线和溶解曲线分析,在茯苓不同生长发育时期,β-tubulin基因表达水平基本恒定;对比内参引物在不同浓度条件下的扩增效率,得到模板和引物的最优浓度分别为80 ng/μL和1μmol/L。在优化后的反应体系中,6个差异表达基因的表达变化趋势与转录组测序结果基本一致,得到的线性相关系数r值均大于0.9,呈显著性正相关。成功地建立了以β-tubulin基因为内参基因的茯苓实时荧光定量PCR体系。
- 吴亚运赵小龙胡炳雄陈平张绍鹏
- 关键词：茯苓Β-TUBULIN实时荧光定量PCRI转录组
- 竹节参根状茎总RNA提取方法的研究与优化被引量：3
- 2015年
- 针对竹节参根状茎质地坚硬、植物纤维多,富含多糖、酚类、蛋白质及其他多种次生代谢产物的特点,研究竹节参根状茎总RNA提取方法。分别运用Trizol法、Total RNA Kit植物提取试剂法、CTAB法进行总RNA的提取。借鉴人参根组织RNA的提取经验,根据竹节参的自身特点,有针对性的对CTAB法和Trizol法进行了优化,样品裂解后中加入PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)和B-巯基乙醇去除酚类,并加入乙酸钠营造出高浓度钠离子环境去除多糖,之后再加入70%高氯酸钠溶液去除蛋白质,并对提取的总RNA进行电泳和OD值检测与分析。优化后的3种方法进行对比发现,对于竹节参总RNA的提取效果有较大差异,其中优化的Trizol法提取的RNA电泳28S、18S条带清晰,比值约为2:1,经紫外光谱分析OD260/OD280比值为1.93,OD260/OD230比值为2.07,获得了纯度高、完整性好的总RNA。进一步以优化的Trizol法提取所得RNA为模版进行反转录,并做RT-PCR,结果表明,RT-PCR的带型特异稳定,优化方法提取的总RNA质量稳定可靠,适用于基因表达等后续分子生物学研究。优化的Trizol法是一种适合于竹节参根状茎总RNA抽提的简单快速有效的方法。
- 吴亚运张绍鹏赵小龙宋佳陈平
- 关键词：竹节参RNA提取RT-PCR根状茎多酚
- 珠子参β-香树素合成酶基因的克隆和生物信息学分析被引量：10
- 2017年
- β-香树素合成酶(beta-amyrin synthaseβAS)是定向分流齐墩果烷型皂苷和达玛烷型皂苷的限速酶,对药用植物三萜皂苷的生物合成具有重要的调控作用。基于珠子参转录组数据中βAS转录本序列设计引物,利用RT-PCR方法从珠子参根状茎中克隆得到βAS基因全长c DNA序列,命名为pjβAS。经测序鉴定该基因长度为2 655 bp,包含一个2 286 bp的完整开放阅读框,编码761个氨基酸,在Gen Bank数据库的登录号为KX254566。生物信息学分析显示,其编码蛋白分子量为87.90 k D,理论等电点(p I)5.84,不含跨膜区,为非分泌蛋白,含有38处磷酸化位点,主要于叶绿体和内质网中发挥生理作用;二级结构预测发现其α-螺旋占39.82%、延伸链16.56%、β-转角10.38%、无规则卷曲33.24%,具有DCTAE、QW(QXXXXXW)和MWCRCY3个氧化鲨烯环化酶(OCS)基因家族特征保守基序;pjβAS蛋白与竹节参(AKN23431.1)序列的一致性为100%,系统进化分析中与竹节参(AKN23431.1)、西洋参(AGG09939.1)、柴胡(ABY90140.2)划为同一分支。通过实时荧光定量PCR分析pjβAS在珠子参不同组织中的相对表达量,发现pjβAS基因在花、叶、茎、根状茎中均有表达,在叶中表达量最高,根状茎中表达量最低。
- 吴亚运赵小龙陈平张绍鹏
- 关键词：珠子参三萜皂苷基因克隆
- 水溶性茯苓多糖PWP-Y提取工艺优化及其分子量测定的研究被引量：4
- 2016年
- 优化水溶性茯苓多糖PWP-Y的提取工艺条件,纯化并测定其分子量。采用正交试验设计,考察超声时间、料液比、提取温度和提取时间等条件对多糖得率的影响,得出最优工艺参数;采用Sevage法脱蛋白、H2O2脱色素、TSKgel PW-M两柱串联色谱柱分离纯化得到均一的茯苓多糖PWP-Y;利用Waters 2414示差检测器联用Wyatt HELEOS-Ⅱ多角度激光光散射检测器,对多糖的绝对分子量和表征进行测定。结果表明:提取多糖的最佳工艺组合为A1B3C3D3,即超声时间为30 min,料液比为1∶50,提取温度为100°C,提取时间为4 h,提取效率为5.62%;茯苓多糖PWP-Y由小分子和大分子2个组分构成,Mw分别为39.3×103、54.3×105,其空间构象为团状。
- 赵小龙杨涛汤进陈平
- 关键词：茯苓多糖分子量测定
