陈红霞
- 作品数：9 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省社会发展科技计划“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学理学更多>>
- 类弹性蛋白ELP在重组蛋白表达与纯化中的应用研究
- 目的：类弹性蛋白ELP是一些人工合成的由五种氨基酸重复排列组成的五肽重复序列单元(VPGXG).ELP具有温度诱导的可逆相变特性,当温度升高至相变温度时ELP就能发生聚集,当温度降低至相变温度以下时,ELP在低温环境中又...
- 林煜齐永李素芹陈红霞沈万鹏饶继先李晓玲孙瑜邓艺李越希
- 关键词：可逆相变表达纯化
- HSV2亚单位疫苗gC2免疫方案的动物实验研究
- 单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus,HSV）是危害人类健康的常见病毒,其感染发病率高,复发感染率高,并且形成终身潜伏感染。目前国内外没有疫苗。HSV有1型和2型两种,HSV2感染主要引发生殖器感染,可...
- 徐亭亭杨彬彬齐永潘英李素芹陈红霞李佳萌郭峻罗霄尹琼邵银秀孙瑜李越希
- 关键词：单纯疱疹亚单位疫苗疗效评价
- 文献传递
- 腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性被引量：1
- 2017年
- 目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白。优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌。用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性。结果成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95%;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90%以上。嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000。制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、11、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体。结论表达制备的包含5种型别HAd V抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础。
- 王新国齐永潘英李素芹李佳萌陈红霞李素梅陈晨徐艺菲张玉彬李越希
- 关键词：人腺病毒抗原表位嵌合蛋白抗原性免疫原性
- 使用CRISPR/Cas-D10A双切口酶技术建立敲除SOSSB1、SOSSB2 和 SOSSC 基因的 HeLa 细胞株
- 目的 使用CRISPR/Cas9双切口酶技术构建敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的稳定HeLa细胞株。方法 设计成对的向导RNA(Single guide RNA,sgRNAs),靶向基因的外显子,PX46...
- 孙瑜陈红霞齐永李素芹饶继先沈万鹏李晓玲李越希
- 关键词：HELA细胞株
- 重组人组织因子的表达纯化及复性研究
- 2016年
- 利用基因工程技术表达重组人组织因子(Human tissue factor,h TF),并进行纯化及复性研究。构建插入目的基因的p ET28a(+)-h TF重组质粒,转化到大肠杆菌中,获得重组菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导其表达,菌体经超声裂解、离心收集包涵体,用8 mol/L尿素溶解包涵体、Ni-NTA纯化,采用透析复性和柱上复性两种方式获得复性的重组人HTF。柱上复性和透析复性均获得具有生物活性的重组人h TF,但柱上复性的复性率为72%,明显高于透析复性的复性率16%。成功构建高表达人重组h TF的工程菌,通过柱上复性获得高纯度具有生物活性的重组人h TF蛋白,为h TF的研究奠定了基础。
- 徐艺菲李佳萌齐永陈红霞潘英李素芹李素梅陈晨王新国张玉彬李越希
- 关键词：纯化复性
- 使用CRISPR/Cas9双切口酶技术建立敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的HeLa细胞株
- 目的 本研究旨在使用新型基因敲除技术,即CRISPR/Cas9双切口酶技术构建敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因的稳定HeLa细胞株,为深入研究SOSS相关蛋白功能提供细胞模型。方法 利用加利福尼亚大学基因组...
- 陈红霞孙瑜齐永李素芹饶继先沈万鹏李晓玲李越希
- 单纯疱疹病毒2型表面糖蛋白D亚单位疫苗免疫佐剂的筛选及免疫方案优化被引量：1
- 2018年
- 目的筛选单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)表面糖蛋白(glycoprotein)D2(g D2)亚单位疫苗的免疫佐剂,对免疫剂量、免疫次数等免疫方案进行优化。方法使用Alum佐剂、Poly I:C佐剂及Alum+Poly I:C混合佐剂,分别配伍不同剂量(2、5、10μg)的gD2蛋白,共制成9种注射制剂,经后腿肌肉注射免疫9组雌性BALB/c小鼠,分别于初次免疫后第28和42天各加强免疫1次,于初次免疫后28 d及第2、3次免疫后14 d,经眼眶静脉窦取血,分离血清,ELISA法检测特异性抗g D2抗体效价;脱颈椎处死小鼠,分离研磨脾脏后,获得脾细胞,加入gD2抗原刺激培养71 h后,收集细胞上清,应用CBA试剂盒测定细胞因子(IL-2、IFNγ、TNF-α)浓度;确定最佳免疫方案。结果初次免疫后28 d,各组总抗体效价偏低,混合佐剂(Alum+Poly I:C)配伍10μg抗原组小鼠血清抗体效价最高,但动物个体差异大。第2次免疫后14 d,各组小鼠血清抗体效价较第1次免疫显著增高;佐剂及抗原剂量对抗体效价影响显著,其中Poly I:C佐剂配伍10μg抗原组小鼠抗体效价及细胞因子分泌水平综合最高。末次免疫后14 d,小鼠血清中抗体效价较第2次免疫再次升高,动物个体间效价差异缩小,混合佐剂组效价最高;各组细胞因子分泌水平较第2次免疫略有增高,混合佐剂配伍2μg抗原组分泌高水平的IL-2、IFNγ、TNF-α。结论小鼠免疫模型中,使用Alum+Poly I:C混合佐剂较使用任一单独佐剂可产生最佳免疫效果,最佳免疫组为混合佐剂配伍2μg抗原组,最佳免疫次数为3次,第1和2次免疫间隔28 d,第2和第3次免疫间隔14 d,最佳免疫剂量为2μg/只小鼠。
- 徐亭亭齐永潘英李素芹陈红霞李佳萌杨彬彬尹琼邵银秀郭峻罗霄李越希
- 关键词：疱疹病毒2型亚单位疫苗佐剂体液免疫
- HSV2 gD2亚单位疫苗配伍不同佐剂的动物免疫研究
- 目的 确定HSV2 候选亚单位疫苗gD 蛋白(gD2)的最佳配伍佐剂、最佳免疫剂量以及免疫程序。方法 使用不同佐剂(Alum、Poly I：C 及Alum&Poly I：C)配伍不同剂量的gD2 蛋白(2μg、5...
- 杨彬彬徐亭亭齐永潘英李素芹陈红霞李佳萌尹琼邵银秀郭峻罗霄孙瑜李越希
- 关键词：GD亚单位疫苗
- 文献传递
- 敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建
- 2018年
- 目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。
- 孙瑜陈红霞齐永李素芹沈万鹏饶继先李佳萌李晓玲李越希
- 关键词：基因敲除HELA细胞株
