潘英
- 作品数：51 被引量：35H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省自然科学基金江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 重组载体pLNCX/iNOS的构建及其在NIH3T3细胞中滴度的测定
- 2002年
- 目的 :构建重组质粒pLNCX/iNOS。方法 :用PCR技术从pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长cDNA ,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒pLNCX/iNOS ;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细胞PA3 17中 ,经G418筛选出抗性克隆。通过NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果 :经过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定重组质粒构建正确。G418筛选出 16个抗性克隆 ,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。NIH3T3细胞测定病毒滴度为 2 .1×10 4CFU·ml-1。结论
- 陈宝安朱梁军朱敏生潘英杜娟陈苏宁王骏邵泽叶
- 关键词：逆转录病毒基因转染NOS
- 耐药基因及病原体高通量检测技术研究
- 李越希李丙军潘英李素芹金慧英陈乐如周婷婷傅雅丽
- 所属科学技术领域：本项目属于传染病医学检验和基因芯片技术领域。目的、意义：病原菌引起的传染病发病率在所有疾病中占据首位。新发传染病耐药病原菌不断出现；抗生素滥用产生了多重耐药及超级耐药菌；基因工程及合成生物学技术，可将耐...
- 关键词：
- 关键词：耐药基因病原体检测
- 人促卵泡生成素基因序列的改构及在CHo细胞内的表达
- 背景：目前国内使用的FSH药物主要是进口的重组人FSH或者是天然人FSH,国产重组人FSH尚未研制成功。目的：构建稳定表达人FSH的CHO细胞株。方法：依据人促卵泡生成素的α亚基和β亚基的蛋白序列,优化设计并化学合成易于...
- 李越希潘明洁李素芹潘英
- 关键词：基因序列真核表达生物药
- 金黄色葡萄球菌外膜蛋白FnBPA表达及单克隆抗体的制备
- <正>目的:金黄色葡萄球菌(又称金葡菌)是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,它寄生于人类皮肤和鼻粘膜表面,占医院感染和社区获得性感染的大部分。金葡菌也是引起食物中毒的重要因素。目前对金葡菌的检测方法有传统...
- 许桂丽蔡冉周洁张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷潘英李素芹李越希
- 文献传递
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gC2蛋白在CHO细胞中的表达、纯化及其免疫活性被引量：1
- 2014年
- 目的在CHO细胞中表达单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)Ⅱ型gC2蛋白,纯化后检测其免疫活性。方法利用ANTHEWIN等软件分析GenBank中HSVⅡ型gC2的氨基酸序列,筛选抗原表位富集、且亲水性较好的蛋白胞外区片段,选择真核和原核生物均偏爱的密码子,通过OptimumGene软件对基因进行序列优化,化学合成全新的基因序列HSV2-gC2,PCR扩增后,插入pMCE5载体,构建重组表达质粒pMCE5-gC2,转染至CHO细胞中进行真核表达。表达的重组gC2蛋白经亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将纯化的重组gC2蛋白分别于第0、2、4周经腹腔免疫小鼠,以免疫PBS作为对照,采用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测免疫小鼠脾淋巴细胞分泌IFNγ(代表Th1细胞因子)和IL-4(代表Th2细胞因子)的细胞频率。结果重组表达质粒pMCE5-gC2经菌落PCR、双酶切(EcoRⅠ/NotⅠ)及测序证实构建正确;纯化的重组gC2蛋白相对分子质量约为90 000,纯度约为85%,浓度为40μg/ml,可与小鼠抗His单克隆抗体特异性结合;通过3次免疫,小鼠产生了高水平的血清抗体,与免疫前相比,差异均有统计学意义(P<0.001);免疫小鼠脾细胞经特异性抗原刺激后,分泌IFNγ和IL-4的细胞频率分别为(13.46±2.832)/106和(19.2±2.48)/106个细胞,均显著高于对照组(P<0.001)。结论在CHO细胞中表达了重组gC2蛋白,纯化的蛋白能够激发小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制HSV亚单位疫苗奠定了基础。
- 周洁蔡冉徐悦玥潘英李素芹尚彦红许桂丽袁敬宇马颖张素芬李越希
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞免疫活性
- 重组人组织因子的表达纯化及复性研究
- 2016年
- 利用基因工程技术表达重组人组织因子(Human tissue factor,h TF),并进行纯化及复性研究。构建插入目的基因的p ET28a(+)-h TF重组质粒,转化到大肠杆菌中,获得重组菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导其表达,菌体经超声裂解、离心收集包涵体,用8 mol/L尿素溶解包涵体、Ni-NTA纯化,采用透析复性和柱上复性两种方式获得复性的重组人HTF。柱上复性和透析复性均获得具有生物活性的重组人h TF,但柱上复性的复性率为72%,明显高于透析复性的复性率16%。成功构建高表达人重组h TF的工程菌,通过柱上复性获得高纯度具有生物活性的重组人h TF蛋白,为h TF的研究奠定了基础。
- 徐艺菲李佳萌齐永陈红霞潘英李素芹李素梅陈晨王新国张玉彬李越希
- 关键词：纯化复性
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型gC蛋白在哺乳动物细胞中的表达及免疫原性检测
- 目的 在哺乳动物细胞中表达并纯化单纯疱疹病毒Ⅱ型表面糖蛋白C(glycoprotein C,gC)胞外抗原表位富集区片段,对其免疫活性进行分析。方法 优化筛选HSV-2 gC蛋白胞外抗原富集区基因序列并化学合成,以pMC...
- 周洁潘英李素芹李越希许桂丽蔡冉张素芬袁敬宇尚彦红徐悦玥马颖周婷婷
- 关键词：单纯疱疹病毒真核表达免疫原性
- 埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2016年
- 目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均>90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。
- 李素梅齐永潘英李素芹李佳萌徐亭亭陈晨王新国徐艺菲李越希
- 关键词：VP1蛋白原核细胞多克隆抗体
- 诱生型一氧化氮合成酶N端蛋白的诱导表达与纯化被引量：1
- 1998年
- 诱生型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）Ｎ端蛋白的表达，对阐明其功能和制备ｉＮＯＳ特异性抗体具有重要意义。本文对ｉＮＯＳ１１９６ＡＡ重组蛋白在大肠杆菌中的表达条件进行了优化，结果表明：在优化条件下，经ＩＰＴＧ诱导，重组蛋白表达量可达菌体蛋白的１５％２０％。为获得重组蛋白纯品，建立了Ｈｉｓ．ＢｉｎｄＴＭ柱亲和层析法和凝胶蛋白的两步纯化法。
- 潘英钱之玉许祥裕朱东亚朱有华朱东亚朱有华朱敏生
- 关键词：诱生型一氧化氮合成酶蛋白纯化
- 正常肌肉和Duchenne肌营养不良肌肉中脑型一氧化氮合酶mRNA及其蛋白表达量的研究
- 2000年
- 目的 检测正常人与Duchenne肌营养不良症 (DMD)患儿肌肉中脑型一氧化氮合酶(nNOS )mRNA及其蛋白的表达水平。方法 建立高敏感性的RNA酶保护实验 ,并通过Westernblot分析的方法 ,对 10例DMD肌肉标本和 5例正常儿童肌肉标本中nNOSmRNA及其蛋白表达情况进行检测。结果 DMD患儿肌肉中nNOSmRNA的表达量只有正常肌肉的 10 % ,nNOS蛋白亦有相同的表达规律。结论 nNOS蛋白在DMD肌肉细胞和肌膜上呈低含量 ,是由于nNOS在转录水平上合成减少所致。
- 朱敏生潘英王刚许祥裕范毓华沈月智刚Kim S LauJamesT Stull
- 关键词：一氧化氮合酶信使肌营养不良
