高文静
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：山西大学生命科学学院更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程更多>>
- 生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定呋喃西林代谢物被引量：9
- 2017年
- 目的建立竞争生物素-亲和素放大酶联免疫吸附测定法(biotin-avidin enzyme linked immumosobent assay,BA-ELISA)检测呋喃西林代谢物。方法采用棋盘法确定单克隆抗体和包被原的最佳稀释倍数,通过单因素试验优化辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(streptavidin-horseradish peroxidase,SA-HRP)稀释倍数、封闭液浓度、竞争反应时间、生物素标记羊抗鼠二抗(biotinylated goat anti-mouse Immunoglobulin G,Biotin-IgG)孵育时间、SA-HRP孵育时间和显色时间,建立标准曲线,并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果最佳实验条件为:包被原稀释倍数为1:800,单克隆抗体稀释倍数为1:12800,SA-HRP稀释倍数为1:8000,封闭液为1%的脱脂乳,竞争反应时间为30 min,Biotin-IgG孵育时间为30 min,SA-HRP孵育时间为60 min,显色时间为15 min;在优化条件下,线性方程为Y=-0.3299X+0.4272(r^2=0.990),IC_(50)为0.601ng/m L,线性范围为0.074~4.883 ng/m L;加标回收率为88.8%~98.5%,批内变异系数(coefficient of variation,CV)和批间CV分别为1.2%~3.6%和2.5%~5.1%,建立的方法与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率(cross reactivity,CR)均小于0.1%。BA-ELISA与高效液相色谱-串联质谱法的回收率均在85%~115%范围内。结论 BA-ELISA法灵敏度高、特异性好、重现性好,可适用于动物组织中呋喃西林代谢物的快速筛查。
- 黄登宇冯敏李亚楠高丽霞高文静杨秀松
- 关键词：兽药呋喃西林氨基脲
- 间接竞争化学发光酶免疫法检测动物源食品中的呋喃西林代谢物被引量：5
- 2017年
- 目的建立动物源食品中呋喃西林代谢物间接竞争化学发光酶免疫检测方法。方法采用活化酯法将衍生后的呋喃西林代谢物半抗原与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联成为包被原;其次,对化学发光液体系、包被原和单克隆抗体的最优稀释倍数及其他反应条件进行优化;最后对该法的灵敏度、特异性、精密度及准确度进行评价。结果化学发光液A液为8 mmol/L对碘苯酚溶液和10 mmol/L鲁米诺溶液(1:1,V:V)混合,B液为每10 m L三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液加5μL 30%H_2O_2溶液,A液与B液临用前体积比1:1混匀;最优反应条件是包被原和单抗稀释倍数均为800,封闭液为1%脱脂乳,竞争时间30 min,酶标二抗孵育60 min;该法的线性方程为Y=-0.4654X+0.3768(r^2=0.993),线性范围为0.123~2.398 ng/m L,IC50为0.544 ng/m L,批内和批间变异系数分别为1.9%~4.1%和2.8%~5.3%,空白鸡肉样品添加回收率为89.6%~98.0%。结论该检测方法简单快速,可用于实验室或现场动物源食品中呋喃西林代谢物的筛查。
- 黄登宇高丽霞李亚楠冯敏高文静杨秀松
- 关键词：呋喃西林氨基脲硝基呋喃类药物
- 呋喃唑酮代谢物间接竞争化学发光酶免疫法的建立被引量：1
- 2017年
- 建立快速检测动物源性食品中呋喃唑酮代谢物AOZ的间接竞争化学发光酶免疫法。利用对醛基苯甲酸(4-CBA)将AOZ衍生化为CPAOZ,利用活化酯法将CPAOZ与卵清蛋白(OVA)偶联,生成完全抗原CPAOZ-OVA。对包被原与抗体的最佳稀释倍数、封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗稀释倍数进行优化,建立标准曲线,同时对方法的特异性进行评价。结果表明:包被抗原最佳稀释倍数为2000倍,抗体的最佳稀释倍数为20000倍、封闭液为2%脱脂乳粉、竞争时间为2 h、二抗最佳稀释倍数为4000倍;线性范围是0.075~7.396 ng/m L,半抑制浓度IC_(50)为0.74 ng/m L,对呋喃唑酮原药的交叉反应率为23.4%,与其他结构类似物及衍生化试剂的交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏度高、特异性好,可为监管部门对于快速检测动物源性食品中AOZ提供依据。
- 黄登宇高文静黄种乾高丽霞冯敏杨秀松
- 关键词：呋喃唑酮动物源性食品
- 呋喃它酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的建立
- 2017年
- 目的建立呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)间接竞争酶联免疫检测法。方法通过衍生化反应制备了人工抗原CPAMOZ并用活化酯法将其与鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)连接成为包被原CPAMOZ-OVA。对包被原和单克隆抗体的最佳工作浓度、封闭液浓度、竞争时间、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗(horseradish peroxidase labelled goat antimouse Ig G conjugate,HRP-Ig G)、孵育时间和显色反应时间进行优化,并对方法灵敏度、特异性、精密度和准确度进行方法学评价。结果最优条件下,包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为500倍和2000倍,封闭液浓度为2%,竞争时间为30 min,二抗孵育时间为30 min,显色时间为15 min。所建立标准曲线的对应线性方程是Y=-0.439X+0.670(r^2=0.992),IC_50为2.439 ng/m L,线性范围为0.506~11.765 ng/m L,回收率为86.7%~90.1%,批内和批间变异系数分别为1.4%~5.8%和2.1%~4.9%。结论该方法特异性强,准确性、精密度和重现性良好,可用于对AMOZ的快速筛查。
- 李鑫史晓亚高丽霞冯敏高文静黄登宇
- 关键词：兽药残留
