刘叶
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性表达及纯化条件的优化
- 2013年
- 以人胎盘cDNA为模板,通过PCR技术特异性扩增出约500bp的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性片段(Soluble TNF-related apoptosis-inducing ligand,sTRAIL)基因。经双酶切后插入到原核表达载体pTASH的Eco RⅠ和HindⅢ之间,转化大肠杆菌JM109菌株。宿主菌主要以可溶形式表达sTRAIL,可溶形式sTRAIL蛋白达到60%。采用两种方法纯化sTRAIL,比较两者对目的蛋白的影响。SDS-PAGE结果显示,破碎上清经过SP-Sepharose FF和RP-HPLC两步纯化后,纯化的蛋白为19kD单一条带,纯度达98%以上;而经过SP-Sepharose FF和Q-Sepharose FF两步纯化的蛋白,纯度只达到93%。Western blot鉴定表明纯化产物为sTRAIL。用HepG2细胞测定sTRAIL的生物学活性,发现重组蛋白在体外能明显诱导肿瘤细胞凋亡。
- 赵芳刘叶吕静代广知谭树华
- 关键词：STRAIL可溶性表达纯化MTT
