刘瑞明
- 作品数：4 被引量：58H指数：4
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鳜嗜水气单胞菌GYK1株胞外产物提取、纯化及生物学活性分析被引量：5
- 2006年
- 以鳜分离的嗜水气单胞菌GYK1株为代表，采用玻璃纸覆盖技术提取了8株嗜水气单胞菌和1株温和气单胞菌的胞外产物，SDS-PAGE电泳分析显示，8株嗜水气单胞菌的胞外产物均有35kDa的共同蛋白带。酶活性和溶血性分析表明，GYK1株胞外产物具有酪蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、明胶酶活性，但不具备脲酶活性；溶血性较强，蛋白浓度为365 μg·mL^-1的胞外产物对鳜血细胞的溶血价为2^13，对加州鲈、银鲫、小白鼠、兔、绵羊、人O型血的红细胞的溶血价在2^11～2^14之间。应用聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶柱层析，对GYK1株的胞外产物进行了初步纯化，得到分子量为35 kDa的蛋白带，该纯化产物具溶血性，但溶血性比粗胞外产物降低，对鳜和小鼠血细胞的溶血价均为2^5。
- 潘厚军石存斌刘瑞明胡学峰张敏吴淑勤
- 关键词：嗜水气单胞菌胞外产物酶活性
- 鳜皮肤黏液IgM样蛋白的纯化被引量：8
- 2007年
- 对经嗜水气单胞菌全菌疫苗浸泡免疫后的鳜皮肤黏液中的免疫球蛋白采用盐析法、重组蛋白A(HiTrap rProteinA Sepharose)亲和层析法及鼠抗鳜血清IgM单克隆抗体偶联的Sepharose 4B亲和层析法分离纯化,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较。结果表明:50%硫酸铵溶液可以沉淀黏液中大部分蛋白,条带仍较多,约十几条,其中含有72 ku和29 ku的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;Sepharose 4B亲和层析法所提取鳜黏液Ig经SDS-PAGE检测,只含有72 ku和29 ku 2个条带(初步认为鳜黏液Ig的重链和轻链),与鳜血清IgM的重、轻链分子量相同;rProteinA亲和层析法所提蛋白除具有上述重链(72 ku)和轻链(29 ku)外,还含有43 ku的蛋白带(可能为鳜黏液Ig另外一种形式的重链)。Western-blot显示,兔抗鳜Ig多克隆抗体可与72 ku及43 ku条带发生发应。两种亲和法所提蛋白纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯鳜黏液Ig的有效方法。
- 罗霞潘厚军巩华石存斌刘瑞明吴淑勤
- 关键词：盐析
- 西伯利亚鲟停乳链球菌的分离、鉴定与致病性被引量：28
- 2009年
- 从患暴发性流行病的西伯利亚鲟(Acipenser baerii)肝脏和心脏中各分离到1株细菌,分离纯化后获得2个分离株,编号分别为AeBF070904、AbHT070912,对分离菌进行了菌株鉴定、致病性分析及药敏实验。分别应用常规生理生化鉴定、全自动细菌测定卡API20STREP和ID32STREP进行检测,结果表明,2个分离株均为停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)。对2个分离株的16S rRNA基因进行PCR扩增和测序,并与GenBank中收录的链球菌16S rRNA基因进行序列分析并构建系统进化树,结果显示,2个分离株的16S rRNA基因序列相同,与停乳链球菌同源性最高达97.3%,在系统进化树上与停乳链球菌聚为一簇,进一步确认2个分离株均为停乳链球菌。从人工感染后发病鱼的内脏组织再分离的细菌特性与原感染菌相同,确认停乳链球菌是西伯利亚鲟的致病菌。2个分离株对西伯利亚鲟、杂交鲟及剑尾鱼均有致死毒性,37℃培养的细菌毒力比28℃培养的细菌毒力强。2个分离株均对青霉素、诺氟沙星等7种药物敏感;对头孢唑啉、庆大霉素等2种药物耐受;对红霉素中等敏感;对卡那霉素等8种药物菌株之间出现差异。
- 潘厚军刘晓勇常藕琴王庆孙慧武刘瑞明付小哲刘雨果吴淑勤
- 关键词：停乳链球菌细菌鉴定RRNA基因序列药物敏感
- 鳜浸泡嗜水气单胞菌全菌疫苗后皮肤黏液抗体的变化被引量：19
- 2007年
- 应用间接ELISA方法,研究经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)疫苗浸泡免疫后鳜(Siniperca chuatsi)皮肤黏液中抗体消长规律,以揭示鳜局部黏膜免疫在免疫保护中的作用及浸泡免疫的保护效果。结果表明,鳜皮肤黏液中抗体滴度在免疫后第7天达到峰值211,抗体从开始形成到消失持续21 d;添加佐剂(IMS1312、葡聚糖、莨菪碱、食盐)可以提高鳜皮肤黏液及血清中抗体滴度和相对免疫保护率,其中添加IMS1312组免疫保护率最高,达77.8%,免疫保护与抗体滴度成正相关(R2=0.79,P<0.05);以溶菌酶为代表的非特异性免疫在免疫后1周内即抗体未形成时,对鱼体起主要保护作用。此外,通过比较鳜血清与皮肤黏液中的抗体消长规律,发现血清中抗体滴度峰值出现时间较迟(第14天),抗体持续时间较长(42 d),初步推断鳜皮肤黏膜中可能存在相对独立于全身免疫系统的局部黏膜免疫系统。
- 罗霞潘厚军巩华刘瑞明石存斌吴淑勤
- 关键词：嗜水气单胞菌疫苗浸泡免疫
