张泽坤
- 作品数：15 被引量：97H指数：7
- 供职机构：北京中医药大学中药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程轻工技术与工程生物学更多>>
- 采用HPLC指纹图谱技术及数据分析方法对不同产地枸杞进行质量评价研究被引量：7
- 2018年
- 目的建立枸杞HPLC指纹图谱,利用LC-MS对主要共有峰进行鉴定,并对4个主产地的枸杞样品进行聚类分析和产地判别分析。方法采用Waters Atlantis T3 C18(5μm,10 mm×250 mm)色谱柱,流动相为乙腈-0.5%磷酸,梯度洗脱;利用中药指纹图谱相似度评价软件及SPSS 22.0软件对数据分别进行相似度评价、聚类分析、判别分析。结果选取12个批次的枸杞样品建立对照指纹图谱,各批次的相似度均大于0.9,可以用于枸杞质量评价。4个产地枸杞的对照指纹图谱彼此之间具有较高的相似度,其中宁夏和新疆的相似度最高为0.95,聚类分析也将两个产地的枸杞聚在一起。利用枸杞色谱图中共有峰的相对峰面积进行判别分析,获得了区分枸杞各产地的指标色谱峰,分别为峰2、峰8、峰18和峰20,该模型对另外隐去产地信息的12个批次的枸杞样品进行了预测,未知产地预测正确率为83.3%。结论本试验建立了枸杞对照指纹图谱,可以作为枸杞药材的质量评价方法。聚类分析及判别分析也取得了较好的结果,为枸杞的产地判别和质量评价提供了新的思路和模式。
- 白光灿李娅琦张泽坤郭慧清王梓轩李月董玲裴纹萱马长华
- 关键词：枸杞指纹图谱聚类分析
- 氯化钠诱导白木香悬浮细胞合成苯乙基色酮类成分的LC-MS分析被引量：2
- 2023年
- 采用超高效液相色谱-串联四极杆静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-MS)结合超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)对氯化钠诱导的白木香悬浮细胞中苯乙基色酮类成分进行定性和定量分析。UPLC-Q-Exactive-MS和UPLC-QQQ-MS/MS均采用Waters T3色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相分别进行梯度洗脱色谱分离,质谱分析均采用电喷雾正离子模式采集。利用UPLC-Q-Exactive-MS从氯化钠诱导的白木香悬浮细胞样品中鉴定出苯乙基色酮类化合物47个,其中简单苯乙基色酮及其苷22个、四羟基四氢苯乙基色酮10个、三元氧环四氢苯乙基色酮15个。通过UPLC-QQQ-MS/MS技术对氯化钠诱导处理后白木香悬浮细胞中25个苯乙基色酮进行了定量。通过2种液质联用技术快速、高效地对氯化钠诱导白木香悬浮细胞中苯乙基色酮类成分进行定性、定量分析,为利用体外培养等生物技术制备沉香中主要的药效和香味物质苯乙基色酮提供重要参考。
- 杜宇张晓雪张泽坤王雯静张蓓蓓张明亮王阳葛祥宇史社坡
- 关键词：白木香悬浮细胞
- 白木香细胞色素P450还原酶基因的克隆、表达与功能鉴定被引量：2
- 2022年
- 细胞色素P450还原酶(cytochrome P450 reductase,CPR)是细胞色素P450酶电子传递链的组成部分,在生物体内起着重要的电子传递作用。本研究从白木香(Aquilaria sinensis)愈伤组织细胞中克隆得到1个CPR基因(Ascpr1),Ascpr1含有一个2124 bp的开放阅读框,编码707个氨基酸残基,其蛋白分子质量为78.82 kD。系统进化分析显示,AsCPR1为Ⅱ型CPR蛋白,与来源于可可树(Theobroma cacao)的CPR蛋白亲缘关系较近。跨膜预测结果显示该蛋白的第52~71位氨基酸为跨膜区,在大肠杆菌Transetta(DE3)中成功表达了N-端缺失67个氨基酸残基的融合蛋白,经亲和色谱纯化后获得对细胞色素C具有还原能力的融合蛋白AsCPR1。本研究结果为进一步研究P450酶参与的白木香防御物质合成及CPR在白木香防御反应中的作用奠定基础。
- 海燕丁宁张泽坤张蓓蓓杜宇张晓雪李娜葛祥宇高博闻史社坡
- 关键词：白木香基因克隆
- 两步凝胶法限量检查中药注射剂中的大分子蛋白质被引量：1
- 2018年
- 目的:建立中药注射剂中大分子蛋白的葡聚糖凝胶色谱法与凝胶高效液相色谱法相结合的两步凝胶限量检查方法,为中药注射剂中大分子蛋白的检测提供方法和实验依据。方法:两步凝胶法第一步为交联葡聚糖凝胶柱色谱分析法,以溶菌酶对照品的出峰时间为临界点,收集临界点之前的中药注射剂洗脱液制备第二步的供试品溶液;第二步为凝胶高效液相色谱法,将制备得到的供试品溶液进样分析。色谱分析条件:色谱柱为TSK-Gel G2000SWXL(7.8 mm×300 mm,5μm),流动相为0.1 mol·L^(-1)硫酸钠和0.1 mol·L^(-1)磷酸缓冲盐等体积混合液(pH 6.7),等度洗脱,流速为0.8 mL·min^(-1),进样量100μL,检测波长280 nm,柱温25℃。结果:溶菌酶对照品进样量在0.05~5μg(R^2=0.9990)范围内呈良好的线性关系,精密度、稳定性、重现性均良好,平均回收率为88.9%,RSD为4.9%。本实验共检测了8个不同品种共18个批次的中药注射剂,不同中药注射剂品种中均能检出大分子蛋白的存在,虽含量略有差别,但均符合本实验设定的20μg·mL^(-1)的检查限量。结论:本实验建立的两步凝胶法准确可靠,解决了中国药典方法的假阳性问题,可用于中药注射剂中大分子蛋白的限量检查,为中药注射剂中大分子蛋白检查提供了更有效的方法,为进一步保证中药注射剂的药品质量和临床用药安全奠定了基础。
- 白光灿马恺悦王安冬卫亚洁张泽坤郭慧清马长华
- 关键词：中药注射剂溶菌酶
- 枸杞HPLC指纹图谱的建立及3种成分测定被引量：7
- 2019年
- 目的建立枸杞HPLC指纹图谱,并测定3种成分的含有量。方法枸杞石油醚-丙酮提取物的分析采用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-甲醇-正己烷-二氯甲烷(40∶15∶20∶20);体积流量1 mL/min;柱温25℃;检测波长450 nm。结果 12批样品指纹图谱中有9个共有峰,相似度均大于0.9。玉米黄素、β-胡萝卜素、玉米黄素双棕榈酸酯分别在0.42~20.80、0.09~4.26、36.80~1 840.00μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率96.5%~103.2%,RSD 2.71%~3.73%。结论该方法稳定可靠,可用于枸杞的质量控制。
- 白光灿李娅琦张泽坤郭慧清王梓轩李月马长华
- 关键词：枸杞指纹图谱玉米黄素Β-胡萝卜素HPLC
- 管花肉苁蓉花中二氢黄酮醇4-还原酶的克隆、表达分析和酶活性鉴定
- 2023年
- 二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是花色素苷生物合成途径的关键酶,在植物花色调控中发挥重要作用。本研究通过管花肉苁蓉花转录组数据分析,利用RT-PCR技术克隆出一条DFR基因并命名为CtDFR,其开放阅读框(ORF)长1263 bp,编码420个氨基酸,蛋白分子质量为47.5 kDa。序列分析表明CtDFR具有NADPH结合域和底物特异性结合域。实时荧光定量PCR表明CtDFR在管花肉苁蓉的红、紫色花中高表达,相对表达量分别是白色花的4.04、19.37倍。构建原核表达载体pET-28a-CtDFR,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,成功表达CtDFR蛋白,纯化得到可溶性重组蛋白。体外酶活性分析表明,重组蛋白CtDFR能催化二氢山柰酚、二氢槲皮素、二氢杨梅素生成无色天竺葵素、无色矢车菊素、无色飞燕草素。亚细胞定位实验结果表明CtDFR主要定位于细胞质中。本研究结果表明CtDFR在管花肉苁蓉花色调控中起到重要作用,为进一步探讨管花肉苁蓉花色形成及调控机制研究奠定了基础。
- 邱海玲王方明高博闻米芯雨张泽坤杜宇史社坡屠鹏飞王晓晖
- 关键词：管花肉苁蓉花色酶活性分析亚细胞定位
- 基于UPLC-Q-TOF/MS的RAW264.7细胞炎症模型的代谢指纹分析被引量：2
- 2017年
- 为揭示炎症细胞模型的极性代谢组特征,该文选择RAW264.7细胞为研究载体,以LPS刺激诱导炎症细胞模型,进行细胞代谢组学的指纹分析。具体方法为:筛选、优化了细胞内极性代谢物的提取方法,建立了利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)进行细胞内代谢组的数据采集方法,采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)进行数据处理,筛选并初步鉴定了17种差异代谢物。结果显示,采用MeOH-CHCl_3-H_2O(8∶1∶1)作为提取溶剂,色谱峰数目较多,细胞内极性代谢物提取效率较高,分析方法的稳定性较好;与正常细胞相比,炎症细胞的蛋白质代谢、糖代谢、核苷酸代谢等代谢通路受到扰动。该研究建立了基于UPLC-Q-TOF/MS的RAW264.7细胞代谢组学指纹分析方法,为揭示细胞炎症机制及抗炎药物机制研究奠定基础。
- 高山山郭慧清张泽坤白光灿高晓燕马长华
- 关键词：代谢组学炎症细胞
- 雷公藤研究进展及其质量标志物的预测分析被引量：31
- 2019年
- 雷公藤是一味传统中药,所含化学成分丰富,具有多方面的药理活性。在刘昌孝院士提出中药质量标志物(Q-marker)新概念的基础上,系统综述了雷公藤化学成分及药理活性,并根据质量标志物的定义结合雷公藤的传统药效、传统药性、临床用药新用途、可测成分、入血成分和配伍研究进行分析,对雷公藤质量标志物进行预测,以期为雷公藤药材质量的深入研究提供参考。
- 肖治均刘传鑫杨欣欣李娅琦王梓轩张泽坤郭慧清马长华
- 关键词：雷公藤倍半萜类二萜类三萜类生物碱类
- 4种秦艽中化学成分的UPLC-LTQ-Orbitrap-MS快速分析研究被引量：5
- 2020年
- 目的利用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术对4种秦艽药材的化学成分进行定性分析。方法采用Waters Acquity UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),在电喷雾正负离子模式下采集数据。将母离子列表(PIL)-MS2和高分辨质谱结合,用于秦艽药材中化学成分的鉴别。结果结合质谱数据和文献数据共鉴定、推断出66个成分,其中包括环烯醚萜类36个、木脂素类5个、黄酮类5个、三萜类12个、其他类8个。其中19个成分为首次报道。结论4种秦艽成分大致相同,利用UPLC-LTQOrbitrap-MS技术结合母离子列表的方法可以快速筛选《中国药典》规定的4种秦艽中的化学成分,为秦艽化学成分的提取分离及其药效物质基础研究提供参考。
- 张泽坤李娅琦王梓轩杨欣欣肖治均马长华
- 关键词：秦艽化学成分
- 核桃内种皮多酚的研究进展及应用前景被引量：9
- 2017年
- 核桃内种皮中含有丰富的对人体有益的多酚物质,但在核桃食品加工过程中往往被当作废弃物来处理,造成资源的巨大浪费,因此开发利用核桃内种皮多酚物质具有重要的现实意义。针对核桃内种皮多酚生理活性的提取和分离技术进行综述,并对其应用前景进行了展望。
- 郭慧清张泽坤白光灿卫亚洁王安冬马长华
- 关键词：多酚
