李海艳
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西研究生教育创新计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- SUV39H1/H2基因表达抑制对德保黑猪成纤维细胞生长的影响研究
- 引言/目的SUV39H是特异性催化H3K9me3形成的组蛋白甲基化转移酶,可促进染色质浓缩形成异染色质。研究发现,H3K9me3沉积在异染色质区是体细胞重编程的障碍,抑制SUV39H1/H2基因的表达能够促进人和小鼠体细...
- 代小丽李海艳王萍张艳石德顺李湘萍
- 转PRL基因小鼠遗传性状分析
- 2016年
- 本研究以原核注射法生产的乳腺特异性表达PRL基因小鼠为模型,从外源基因遗传完整性、拷贝数和插入位点3方面对其进行遗传性状分析,为今后大型转基因动物的选育提供基础。采用基因组DNA PCR方法筛选发生外源基因片段部分缺失的小鼠,并进行Southern blot验证,以检测外源基因的遗传完整性;用绝对荧光定量PCR方法测定外源基因拷贝数,用Genome walking方法分析外源基因整合位点。结果显示,外源基因片段部分缺失率为1.91%;整合十几个拷贝外源基因的小鼠在便携UV灯下可见绿色荧光,整合2个拷贝的小鼠无绿色荧光;在NW_001073945.1序列的2 025～2 026bp和NW_001030574.1序列的10 760 020～10 760 021bp处插入的外源基因可正常表达。以上结果说明,外源PRL基因在原核注射法生产的转基因小鼠中可稳定遗传;在一定范围内,外源基因的表达量与拷贝数呈正相关;附近无其他基因的外源基因插入位点有利于外源基因的表达。
- 任艳萍谢亮亮李海艳石德顺李湘萍
- 关键词：转基因动物遗传性状拷贝数
- 毛壳素对德保黑猪核移植胚胎体外发育潜能影响的初步研究
- 体细胞重编程的不完全以及克隆胚胎在表观遗传修饰、多能性维持等方面的异常是造成体细胞核移植技术效率低下的重要原因。组蛋白H3K9三甲基化是一种重要的表观遗传修饰，在体细胞重编程和胚胎发育过程中具有重要作用。毛壳素(chae...
- 李海艳
- 关键词：胚胎发育发育潜能
- 猪JHDM2A基因的克隆及表达分析被引量：2
- 2017年
- 试验旨在克隆猪JHDM2A基因,并研究其在猪卵巢组织中的表达情况。首先克隆猪JHDM2A基因,并构建pLVX-IRES-ZsGreen1-JHDM2A真核表达载体,同时对JHDM2A基因在猪卵泡发育过程中的表达情况进行分析。结果显示,克隆得到的猪JHDM2A基因编码区长度为3 945bp,编码1 315个氨基酸。通过多重氨基酸序列比对发现,猪JHDM2A基因与黄牛、水牛、绵羊和人相应氨基酸序列的同源性分别为93.5%、94.7%、94.7%和93.8%。蛋白质分子系统进化树分析结果表明,JHDM2A基因在物种进化过程中高度保守。通过脂质体转染法将构建的pLVX-IRES-ZsGreen1-JHDM2A真核表达载体导入HEK293T细胞,可观察到清晰的绿色荧光蛋白表达。免疫组化结果显示,JHDM2A蛋白在不同发育阶段猪卵泡中均有表达。本试验通过克隆获得猪JHDM2A基因序列,JHDM2A蛋白在猪卵巢中高度表达,表明其功能可能与猪卵泡发育密切相关。
- 宋延霞吴大平李海艳李胜粟小平李湘萍
- 关键词：克隆卵泡
- 毛壳素对猪核移植胚胎体外发育潜能的影响研究被引量：2
- 2021年
- 为了解H3K9三甲基化表达水平对德保猪核移植胚胎发育潜能的影响,本试验使用毛壳素处理德保猪胎儿成纤维细胞,利用体细胞核移植技术观察猪核移植胚胎的体外发育和相关基因mRNA表达情况。结果显示,不同浓度毛壳素处理(20、30、50 nmol/L)德保猪成纤维细胞24 h时,20 nmol/L处理组的细胞生长曲线与未处理组相似,呈“S”型。实时定量PCR检测结果显示,20 nmol/L和30 nmol/L毛壳素处理均会显著降低SUV39H1/2和G9a在成纤维细胞中的表达(P<0.05)。核移植胚胎体外发育结果显示,与未处理组相比,20 nmol/L处理可显著提高核移植胚胎的4-细胞发育率和囊胚发育率(P<0.05);30 nmol/L处理的卵裂率、4-细胞发育率和囊胚发育率显著降低(P<0.05)。实时定量PCR检测结果显示,与未处理组相比,20 nmol/L处理可显著降低SUV39H1/2和G9a在2-细胞、4-细胞和8-细胞期核移植胚胎中的表达,显著提高2-细胞、4-细胞和核移植胚胎中eIF3A和TFIIA、囊胚中Nanog和Oct-4基因的表达(P<0.05)。研究结果表明:适宜浓度的毛壳素处理可降低德保猪核移植胚胎中H3K9me3的表达,提高核移植早期胚胎的发育潜能。
- 王婷李海艳刘晨孙乐杨婷石德顺李湘萍
- 关键词：胚胎发育
- ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析
- 2016年
- 为研究猪miR-148a(ssc-miR-148a)的转录调控机制,对其启动子进行了克隆及分析。本试验首先设计特异性PCR扩增引物,分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段,并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上。通过生物信息学方法,在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位。将重组报告质粒转染293T细胞,分析启动子活性。采用不同浓度碱性成纤维生长因子(bFGF)处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞,检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的表达,及其对启动子活性的影响。结果显示,克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043bp片段具有启动子活性,该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点。0、5和10ng·mL-1浓度bFGF处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后,ssc-miR-148a表达均显著下降(P<0.05),DNMT1 mRNA显著增加(P<0.05)。启动子活性均显著下降(P<0.05),5和10ng·mL-1浓度间无显著差异(P>0.05)。结果表明,ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043bp片段内,启动子区域有转录因子SP1结合位点,其表达受bFGF的调控。
- 王萍郝文艳曹丽华沈开元代小丽李海艳梁贤威石德顺李湘萍
- 关键词：启动子克隆BFGFDNMT1
