代小丽
- 作品数：13 被引量：7H指数：2
- 供职机构：柳州市人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 卵巢功能减退患者卵泡液外泌体差异表达miRNA筛选及生物学功能分析
- 2023年
- 目的 筛选卵巢功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者卵泡液外泌体差异表达微小核糖核酸(micro RNA,mi RNA),探索其与DOR相关的潜在分子机制。方法 收集2021年12月~2022年3月于柳州市人民医院生殖医学科辅助生殖助孕18例患者的卵泡液为研究样本,根据卵巢功能评估结果分为卵巢功能正常(Normal)组和卵巢功能减退(DOR)组。miRNA PCR阵列芯片法检测两组卵泡液外泌体miRNA的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证芯片结果,最后通过生物信息学分析差异表达miRNA的靶基因及其富集的相关生物学功能和分子通路。结果 DOR组筛选出5条差异表达miRNA:let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达下调,miR-483-3p表达上调;qRT-PCR验证结果显示与Normal组比较,DOR组let-7d-3p,let-7e-5p,miR-25-3p和miR-30c-5p表达降低,miR-483-3p的表达升高,差异具有统计学意义(t=3.147,4.405,3.95,3.147,-3.198,均P<0.05);差异表达miRNA的靶基因主要富集于p53信号通路和FoxO信号通路,靶基因CDKN1A, RRM2, CCND1, SESN3, MDM4, BCL2L11,SMAD4, IGF1及IGF1R参与p53信号通路和FoxO信号通路,靶基因METTL3,METTL6及METTL8参与RNA m6A甲基化。结论 DOR患者卵泡液外泌体中的差异表达miRNA参与p53和FoxO信号通路及RNA m6A甲基化的调控,是DOR发生机制和诊疗的潜在标靶。
- 沈开元曲晓力代小丽代小丽邹乾兴梁媛媛罗平
- 关键词：卵巢功能减退微小核糖核酸
- 猪紧密连接蛋白1基因克隆及其shRNA片段的筛选
- 2016年
- 试验旨在筛选有效抑制猪紧密连接蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)基因表达的shRNA干扰片段,为后期利用RNA干扰技术深入了解ZO-1基因在猪卵母细胞成熟过程中的功能奠定基础。本研究首先克隆了猪ZO-1基因,并构建了其真核表达载体,而后筛选了有效抑制ZO-1基因表达的shRNA干扰片段。结果表明,猪ZO-1基因编码区长度为3 036bp,多重序列比对结果显示,猪ZO-1基因核苷酸序列与牛、羊、马和人相应序列的同源性分别为88%、88%、87%和85%。构建的pDsRed-N1-ZO-1真核蛋白融合表达载体经脂质体法转染HEK293T细胞后,可观察到清晰的RFP红色荧光蛋白表达。将靶质粒与shRNA干扰质粒共转染HEK293T细胞48h后,与对照组相比,可观察到红色荧光表达得到抑制。实时荧光定量PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对猪ZO-1基因表达均有抑制效果,其中ZO-1shRNA201的抑制效果显著高于ZO-1shRNA1276(77.8%和67.0%,P<0.05)。
- 曹丽华王萍郝文艳代小丽陈培芳石德顺李湘萍
- 关键词：ZO-1基因克隆SHRNA
- 成熟前后水牛卵母细胞蛋白质组的初步研究被引量：2
- 2016年
- 应用聚丙烯酰胺凝胶电泳联合反相液相色谱-串联质谱(RP-LC-MS/MS)蛋白质组学技术,研究GV期和MII期水牛卵母细胞蛋白质组,以期为揭示水牛卵母细胞体外成熟分子机理、筛选与卵母细胞成熟质量相关蛋白质奠定理论基础。从GV期和MII期水牛卵母细胞中分别鉴定到647和570种蛋白质(FDR<1%)。其中,鉴定相同蛋白质414种;GV期和MII期卵母细胞特有鉴定蛋白质分别为233种和156种。通过谱图计数法获得鉴定蛋白质的半定量信息,从GV期和MII期水牛卵母细胞中筛选到9种高丰度蛋白质。其中8种为相同蛋白质,包括穹窿体蛋白、谷胱苷肽S-转移酶M3、蛋白精氨酸脱亚氨酶6、过氧化物氧化还原酶2、二磷核苷酸激酶B、动力蛋白轻链1、醛糖还原酶、类甘油醛-3-三磷酸脱氢酶同源物2等。热激蛋白90α和谷胱甘肽S-转移酶P分别为GV期和MII期水牛卵母细胞特有的高丰度蛋白质,这些蛋白质可能与水牛卵母细胞成熟过程密切相关。GO(Gene Ontology)和KEGG分析显示,鉴定相同蛋白质主要集中在丙酮酸盐代谢、三羧酸循环(TCA)、糖酵解/糖原生成、磷酸戊糖途径等能量代谢通路,提示水牛卵母细胞成熟过程中可能需要维持高的能量代谢水平,以保证卵母细胞减数分裂的完成。GV期细胞特有鉴定蛋白质主要集中在氧化磷酸化、核糖体以及蛋白酶体等KEGG通路,表明GV期卵母细胞可能具有高的氧化磷酸化和蛋白合成水平,蛋白酶体在推动水牛卵母细胞成熟进程中可能发挥重要作用。MII期细胞特有鉴定蛋白质主要集中在DNA复制和氨基糖、核苷糖代谢等KEGG通路,提示水牛卵母细胞可能在为后续的受精过程和早期卵裂进行遗传物质的准备。综上表明,成熟前后水牛卵母细胞蛋白质表达模式,为进一步深入了解水牛卵母细胞成熟分子机理奠定理论基础。
- 陈凌声代小丽徐永茹罗婵陆凤花蒋建荣石德顺徐平李湘萍
- 关键词：水牛体外成熟卵母细胞蛋白质组
- SUV39H1/H2基因表达抑制对猪体细胞克隆胚胎发育潜能影响的初步研究
- 体细胞克隆效率主要取决于供体细胞核是否被完全重编程，而供体细胞重编程涉及去除表观遗传标记，将其逆转为未分化的状态，获得可重新分化成各种类型细胞的能力[1]。组蛋白3第9位赖氨酸三甲基化(H3K9me3)依赖的异染色质是体...
- 代小丽
- 关键词：胚胎发育体细胞克隆
- 文献传递
- SUV39H1/H2基因表达抑制对德保黑猪成纤维细胞生长的影响研究
- 引言/目的SUV39H是特异性催化H3K9me3形成的组蛋白甲基化转移酶,可促进染色质浓缩形成异染色质。研究发现,H3K9me3沉积在异染色质区是体细胞重编程的障碍,抑制SUV39H1/H2基因的表达能够促进人和小鼠体细...
- 代小丽李海艳王萍张艳石德顺李湘萍
- H3K4和H3K9三甲基化在猪体外成熟卵母细胞和克隆胚胎中的表达分析
- 2017年
- 该研究主要运用单细胞免疫荧光技术分析猪卵母细胞和克隆胚胎发育过程中,H3K4和H3K9三甲基化(H3K4me3,H3K9me3)的表达情况.收集体外成熟0h,6h,12h,24h,30h,36h,42h的猪卵母细胞;同时通过体细胞核移植操作获得一细胞、四细胞、桑葚胚和囊胚期克隆胚胎,经过免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察H3K4me3和H3K9me3修饰在卵母细胞和胚胎中的变化情况.免疫荧光结果显示,在不同减数分裂阶段的猪卵母细胞内均能观察到H3K4me3的表达,并且呈现出逐渐下降的趋势;在生发泡期(GV),生发泡晚期(L-GV)和生发泡破裂(GVBD)阶段的卵母细胞中能发现明显的H3K9me3表达,随着减数分裂的进行,H3K9me3表达消失,在第一次减数分裂中期前阶段(Pre-MI)到第二次减数分裂中期(MⅡ)阶段卵母细胞中未发现H3K9me3荧光信号.H3K4me3和H3K9me3在不同发育阶段的猪克隆胚胎中都有表达,其中H3K4me3在不同阶段胚胎中荧光信号强度相近,H3K9me3在四细胞胚胎中荧光强度降低,在桑葚胚和囊胚中荧光强度出现升高的趋势.以上结果说明,H3K4me3参与调控猪卵母细胞体外成熟的整个过程,H3K4me3和H3K9me3在猪体细胞核移植胚胎早期发育过程中可能具有调控作用.
- 沈开元代小丽杨婷佘春石德顺李湘萍
- 关键词：卵母细胞
- 卵巢储备功能减退患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响被引量：1
- 2022年
- 目的探讨卵巢储备功能减退(DOR)患者卵泡液外泌体对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,以期为女性因DOR导致的生育功能降低和不孕症的发生提供新的科学实验数据。方法选取SPF级4~6周龄C57BL/6J未孕雌性小鼠,收集未成熟卵母细胞并进行体外成熟培养;同时收集DOR患者卵泡液,并提取外泌体。利用Dio荧光标记外泌体后与小鼠未成熟卵丘-卵母细胞复合物(COCs)共孵育培养,观察外泌体摄入情况;通过添加不同浓度0、50、100和150μg/ml外泌体处理小鼠未成熟COCs 16 h观察卵丘扩展和第一极体排出情况,分析其对卵母细胞成熟的影响并筛选出最佳处理浓度;设置分组为体内成熟组(control)、外泌体添加组(exo+)和未添加组(exo-),各组成熟后的COCs利用qPCR检测卵丘扩展相关基因Has2、Tnfaip6和Ptgs2以及凋亡相关基因Bax、Bcl2的mRNA相对表达水平,分析各组间的差异。结果(1)Dio标记的外泌体与小鼠COCs共孵育,卵丘颗粒细胞上能观察到明显的Dio荧光信号,证实COCs能够摄入外泌体;(2)不同浓度外泌体处理组的GV期卵母细胞百分比均显著高于0μg/ml组(P<0.05),而MⅡ期卵母细胞百分比均显著低于0μg/ml组(P<0.05)。使用150μg/ml作为后续实验工作浓度;(3)qPCR的结果显示,小鼠COCs中卵丘扩展相关基因Has2的mRNA表达水平在体内成熟组及体外成熟培养组各组间的差异无统计学意义(P>0.05),exo+组和exo-组的Tnfaip6、Bcl2和Bax mRNA表达水平均显著低于control组(P<0.05或P<0.01),exo+组Ptgs2的mRNA表达水平显著低于control组(P<0.05);此外,exo+组Tnfaip6、Ptgs2和Bcl2的mRNA表达水平均显著低于exo-组(P<0.05或P<0.01)。结论DOR患者卵泡液外泌体能够抑制小鼠卵母细胞体外成熟过程中卵丘扩展和减数分裂恢复,并且显著抑制了卵丘扩展相关基因Ptgs2和Tnfaip6以及细胞凋亡抑制基因Bcl2的表达。
- 沈开元杨冠群罗平代小丽黄萍梁媛媛李顺陈立群曲晓力
- 关键词：外泌体体外成熟
- 重组杆状病毒载体在基因治疗中的应用被引量：2
- 2020年
- 重组杆状病毒作为安全、可靠的基因治疗载体,在神经性疾病、心血管疾病以及恶性肿瘤的基因治疗中具有重要的应用价值。随着分子生物学技术日趋成熟,杆状病毒表达系统的研究使得该载体能够成功规避机体血液中补体系统的清除。另外,具有组织特异性的启动子也为实现各类重组病毒载体的靶向治疗发挥了重要的作用。该文对重组杆状病毒基因治疗载体的研究进行总结和阐述,以期对构建p53基因重组杆状病毒基因治疗载体提供文献依据,实现更安全、可靠、精准的基因治疗策略。
- 廖致红代小丽吴春凤刘志华李丽敏徐鹏沈开元
- 关键词：杆状病毒基因治疗
- CRISPR/CAS9系统定向修饰水牛BMP15基因的研究
- 引言 骨形态发生蛋白15 (BMP15)是转化生长因子β(TGFβ)的超家族成员,特异性表达于许多哺乳动物的卵巢,是繁殖性状的负调控基因.BMP15-/+母羊排卵数和产子数显著多于BMP15+/+型,而BMP15-/-的...
- 冯万有粟小平代小丽刘晓淋刘庆友石德顺
- C型利钠肽及其受体在水牛卵泡中的表达分析被引量：1
- 2016年
- 为了探明C型利钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)及其受体(natriuretic peptide receptor,NPR)在水牛卵泡中的表达模式,本研究首先采用实时荧光定量PCR技术检测水牛卵巢中利钠肽家族主要成员A型、B型、C型利钠肽(ANP、BNP、CNP)及其Ⅰ型、Ⅱ型受体(NPR1、NPR2)的mRNA表达情况,然后利用免疫组化技术对水牛卵泡中CNP及NPR2蛋白进行定位,最后利用实时荧光定量PCR技术检测颗粒细胞和卵丘细胞中CNP及NPR2的mRNA表达规律。结果显示,水牛卵巢主要表达CNP及NPR2,且在各级卵泡中均有表达,其中,CNP主要在壁层颗粒细胞中表达,NPR2主要在卵丘细胞中表达;颗粒细胞上CNP mRNA表达水平显著高于卵母细胞周围的卵丘细胞(P<0.05),而卵丘细胞上NPR2mRNA表达水平显著高于颗粒细胞(P<0.05)。综上所述,在利钠肽主要家族成员和受体中,CNP和NPR2在水牛卵巢中呈现强表达,CNP主要在壁层颗粒细胞中表达,而NPR2主要在卵母细胞周围的卵丘细胞中表达。
- 周文婷孙龙飞尹娜杜姗姗赵鑫代小丽陆凤花石德顺
- 关键词：C型利钠肽
