郝文艳
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪紧密连接蛋白1基因克隆及其shRNA片段的筛选
- 2016年
- 试验旨在筛选有效抑制猪紧密连接蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)基因表达的shRNA干扰片段,为后期利用RNA干扰技术深入了解ZO-1基因在猪卵母细胞成熟过程中的功能奠定基础。本研究首先克隆了猪ZO-1基因,并构建了其真核表达载体,而后筛选了有效抑制ZO-1基因表达的shRNA干扰片段。结果表明,猪ZO-1基因编码区长度为3 036bp,多重序列比对结果显示,猪ZO-1基因核苷酸序列与牛、羊、马和人相应序列的同源性分别为88%、88%、87%和85%。构建的pDsRed-N1-ZO-1真核蛋白融合表达载体经脂质体法转染HEK293T细胞后,可观察到清晰的RFP红色荧光蛋白表达。将靶质粒与shRNA干扰质粒共转染HEK293T细胞48h后,与对照组相比,可观察到红色荧光表达得到抑制。实时荧光定量PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对猪ZO-1基因表达均有抑制效果,其中ZO-1shRNA201的抑制效果显著高于ZO-1shRNA1276(77.8%和67.0%,P<0.05)。
- 曹丽华王萍郝文艳代小丽陈培芳石德顺李湘萍
- 关键词：ZO-1基因克隆SHRNA
- GABRP对水牛乳腺上皮细胞增殖以及泌乳相关基因表达的影响
- γ-氨基丁酸是大脑中抑制性递质的一种重要成分，在神经信号传递中起着重要作用。除脑组织外，γ-氨基丁酸及其受体还存在于多种外周组织中。γ-氨基丁酸的受体有A、B、C三种类型，其中A、C属于门控Cl-通道，B型受体是代谢型受...
- 郝文艳
- 关键词：水牛乳腺上皮细胞细胞增殖
- 水牛GABA A型受体π亚基基因的克隆及其在乳腺组织中的表达
- 2016年
- γ-氨基丁酸(GABA)是大脑中一种重要的抑制性递质,除与兴奋的传递有关外,还在内分泌组织中发挥着重要的作用。本研究对水牛GABA A型受体的π亚基基因(GABRP)CDS序列进行了克隆,并对其进行了生物信息学分析,同时应用实时荧光定量PCR和免疫组化技术分析了GABRP基因在水牛乳腺组织中的表达情况。结果表明,应用RT-PCR技术成功获得了广西本地水牛GABRP基因序列,长为1 401bp;BLAST比对结果显示,广西本地水牛的GABRP核苷酸序列与和河流型水牛的同源性为99%,GABRP在不同物种中具有较高的保守性;GABRP蛋白主要在水牛乳腺组织的腺泡上皮细胞中表达,GABRP基因在泌乳期及非泌乳期水牛乳腺组织中都有表达,且非泌乳期GABRP基因的表达显著高于泌乳期(P<0.05)。试验结果为进一步研究GABRP基因在水牛乳腺发育过程中的功能奠定了基础。
- 郝文艳陈培芳代小丽王萍吴大平石德顺李湘萍
- 关键词：水牛乳腺组织
- ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析
- 2016年
- 为研究猪miR-148a(ssc-miR-148a)的转录调控机制,对其启动子进行了克隆及分析。本试验首先设计特异性PCR扩增引物,分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段,并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上。通过生物信息学方法,在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位。将重组报告质粒转染293T细胞,分析启动子活性。采用不同浓度碱性成纤维生长因子(bFGF)处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞,检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的表达,及其对启动子活性的影响。结果显示,克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043bp片段具有启动子活性,该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点。0、5和10ng·mL-1浓度bFGF处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后,ssc-miR-148a表达均显著下降(P<0.05),DNMT1 mRNA显著增加(P<0.05)。启动子活性均显著下降(P<0.05),5和10ng·mL-1浓度间无显著差异(P>0.05)。结果表明,ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043bp片段内,启动子区域有转录因子SP1结合位点,其表达受bFGF的调控。
- 王萍郝文艳曹丽华沈开元代小丽李海艳梁贤威石德顺李湘萍
- 关键词：启动子克隆BFGFDNMT1
