- 肝细胞核因子4α在胆汁酸诱导的胃黏膜肠上皮化生中的作用及其机制被引量：3
- 2018年
- 目的探讨肝细胞核因子4α（HNF4α）在鹅脱氧胆酸（CDCA）诱导的胃黏膜肠上皮化生中的作用与机制。
方法以不同浓度的CDCA刺激人永生化胃黏膜上皮细胞GES-1后，采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测GES-1和人胃癌细胞系（AGS、SGC7901、BGC823）中HNF4α、尾侧同源盒转录因子2（CDX2）和三叶肽因子家族3（TFF3）的mRNA和蛋白质表达变化。用HNF4α短发夹RNA和对照短发夹RNA分别转染GES-1后，以CDCA刺激，采用蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2和TFF3的蛋白质表达。采用慢病毒感染的方法，分别在GES-1和SGC7901中过表达HNF4α，在BGC823和AGS中静默HNF4α，以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2、TFF3的mRNA和蛋白质表达。采用荧光素酶报告基因实验分析HNF4α对CDX2的调控作用。统计学分析采用t检验。
结果GES-1、SGC7901、BGC823和AGS的HNF4α mRNA水平分别为1.00±0.12、263.01±10.23、848.01±18.13和3 049.86±91.75；其中AGS、BGC823和SGC7901的HNF4α mRNA水平均高于GES-1，差异均有统计学意义（t＝33.23、46.72、25.62，P均〈0.01）；AGS、BGC823、SGC7901和GES-1的HNF4α蛋白质表达与mRNA表达一致。转染HNF4α短发夹RNA组的CDX2和TFF3蛋白质表达低于未转染HNF4α短发夹RNA组。在GES-1细胞中，过表达HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为16 281.839±1 843.017、6.275±0.137和17.310±1.533，分别高于过表达对照组的1.000±0.048、1.000±0.012和1.000±0.108，差异均有统计学意义（t＝8.83、38.29、10.61，P均〈0.01）；在AGS细胞中，静默HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为0.021±0.001、0.088±0.007和0.074±0.002，分别低于静默对照组的1.000±0.108、1.000±0.131和1.000±0.122，差异均有统计学意义（t＝9.09、6.93、7.57，P均〈0.01）；在GES-1过表达细胞和AGS静默细胞中，HNF4α、CDX2、TFF3的蛋白质表达与mRNA表达一致。在克隆有CDX2-1（－2 000～－1 bp）�
- 闵亚莉倪阵雷超袁挺杜风刘凯歌时永全
- 关键词：肝细胞核因子4Α肠上皮化生
- miR-139-5p调控KRAS突变结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的功能与机制研究被引量：1
- 2017年
- 目的建立结直肠癌KRAS突变细胞DKO-1的miR-139-5p功能获得模型,探讨miR-139-5p对KRAS突变结直肠癌细胞恶性表型的影响及可能的分子机制。方法利用real-time PCR检测miR-139-5p在KRAS突变同源细胞系中表达;通过瞬时转染建立miR-139-5p功能获得细胞模型;通过绘制MTT生长曲线和集落形成实验检测miR-139-5p对DKO-1细胞生长增殖的影响;通过细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-139-5p对DKO-1细胞生长迁移侵袭的影响;通过生物信息学分析miR-139-5p的下游靶基因,利用双荧光酶报告基因实验验证miR-139-5p与靶基因的直接结合情况。结果 miR-139-5p在KRAS突变结直肠癌细胞中表达降低(P<0.01);过表达miR-139-5p能够抑制DKO-1细胞的生长能力(P<0.01)、集落形成能力(P<0.01)、迁移和侵袭能力(P<0.01);miR-139-5p能够直接结合FOS基因的3'-UTR区(P<0.01)。结论 miR-139-5p能够抑制DKO-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制FOS基因表达有关。
- 曹田宇杜风李婷宇卢瑗瑗赵晓迪
- 关键词：结直肠癌细胞增殖迁移
- miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制被引量：6
- 2018年
- 目的:探究miR-302a对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响及机制。方法:在四株结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中,通过转染miR-302a mimic构建miR-302a过表达模型,RT-PCR检测过表达效果;CCK-8法检测转染48 h后高表达miR-302a细胞的增殖能力及对奥沙利铂的敏感性;蛋白质印迹法检测转染后P-gp蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的变化。结果:相比正常小肠上皮细胞HIEC,miR-302a在结直肠癌细胞系HT29、HCT8、SW480、SW1463中的表达较低。转染mimic后,miR-302a的表达明显上调(P<0.001)。增殖实验发现miR-302a的上调并不影响结直肠癌细胞的增殖,而在转染miR-302a的细胞中加入奥沙利铂,miR-302a组HT29、HCT8、SW480和SW1463细胞存活率相比miR-NC组分别降低2.46、1.89、2.39、2.86倍。进一步探究miR-302a增加奥沙利铂敏感性的机制,发现miR-302a可抑制P-gp蛋白的表达,并且抑制Wnt/β-catenin通路相关蛋白MMP-7、c-Jun、c-myc、β-catenin、LEF1的表达。结论:miR-302a可增加结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性,其机制可能是通过抑制P-gp的蛋白表达,并抑制Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达而实现。
- 孙丽娜孙利慧杜风汪鑫陈萍赵晓迪卢瑗瑗王新
- 关键词：结直肠癌耐药奥沙利铂
- miR-181d在结肠癌中表达失调并抑制癌细胞增殖及凋亡被引量：1
- 2017年
- 目的检测结肠癌细胞系中miR-181d的表达水平,研究miR-181d对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法 RTqPCR检测结肠癌细胞HCT116,HT29,LoVo,SW480及SW620和永生化肠黏膜上皮细胞HIEC中miR-181d的表达。在LoVo细胞中转染miR-181d模拟物及对照,SW620细胞中转染miR-181d抑制物及对照,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡比例。结果 miR-181d表达水平在各结肠癌细胞系中均较正常肠黏膜上皮细胞HIEC显著降低(F=29.34,P<0.01)。在LoVo细胞中过表达miR 181d能够显著减慢细胞体外增殖(F=5.403,P<0.01),细胞周期检测示S期细胞比例降低(t=4.71,P<0.05),凋亡细胞显著增多(t=3.47,P<0.05)。在SW620细胞中抑制miR-181d的表达能够显著加快细胞体外增殖(F=20.82,P<0.01),细胞周期检测示细胞周期加速,S期细胞比例增高(t=2.92,P<0.05),细胞凋亡率显著减少(t=4.14,P<0.05)。结论 miR-181d在结肠癌细胞系中表达普遍下调,有望成为结肠癌新的诊断标志物。miR-181d能够通过抑制结肠癌细胞增殖和促进凋亡,发挥抑癌基因的作用。
- 吴奇申高飞孙丽娜汪鑫耿蕾杜风赵晓迪卢瑗瑗
- 关键词：结肠癌增殖凋亡
