刘晓辉
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目辽宁省医学高峰建设工程项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 树突状细胞感染PSMA/4-1BBL基因重组腺病毒后的免疫功能变化被引量：1
- 2012年
- 目的:观察复制缺陷型腺病毒介导的人前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)基因和肿瘤坏死因子配体超家族成员4-1BB配体(4-1BB ligand,4-1BBL)基因体外共同感染的树突状细胞(dendritic cell,DC)的免疫学功能变化。方法:Ad-GFP空载体感染未成熟DC,确定最适MOI。将感染的健康志愿者外周血来源DC分为Ad-PSMA/4-1BBL-DC组(共感染组)、Ad-PSMA-DC组、Ad-4-1BBL-DC组、Ad-GFP-DC组以及未感染DC组,荧光倒置显微镜观察DC的形态学变化,流式细胞仪分析CD80、CD83、CD86等表型变化,Western blotting检测DC上PSMA和4-1BBL蛋白的表达,ELISA法检测各组DC上清的IL-12水平,CCK-8法检测各组DC刺激自体T淋巴细胞增殖能力及对人前列腺癌细胞株LNCap、Du145和22RV的细胞毒作用。结果:确定最佳MOI为200。共感染组DC表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR共刺激分子均上调,明显高于未感染DC组[(38.72±0.99)%、(44.65±0.77)%、(63.60±0.75)%、(62.25±0.58)%vs(28.27±1.04)%、(28.08±1.16)%、(41.05±1.33)%、(46.87±1.12)%;P<0.05]。共感染组IL-12分泌水平明显高于单个基因重组腺病毒感染组及未感染组[(134.29±2.22)vs(79.51±1.60)、(70.33±1.13)、(69.67±1.43)、(28.88±2.97)pg;P<0.05]。DC∶T同一比例下,共感染组刺激自体T细胞增殖能力明显高于单感染组及未感染组(P<0.05)。PSMA/4-1BBL-DC-CTL对PSMA阳性的LNCap细胞的杀伤率明显高于对另两种PSMA阴性细胞DU145、22RV的杀伤率(P<0.05),也明显高于PSMA-DC-CTL组、4-1BBL-DC-CTL组的杀伤率(P<0.05)。结论:Ad-PSMA/4-1BBL感染后,DC不但高分泌IL-12,还能刺激和增强肿瘤特异性CTL对PSMA阳性前列腺癌细胞的杀伤作用;Ad-PSMA和Ad-4-1BBL共感染DC较单一感染DC能更有效诱导肿瘤特异性CTL。
- 杨明花王帅孙海燕刘晓辉马楠隋承光
- 关键词：4-1BBL基因细胞毒性T淋巴细胞
- 不同浓度不溶性镍化物与人肺癌A549细胞内Cap43、HIF-1α关系的研究
- 2010年
- 目的探讨不同浓度不溶性镍化物对人肺癌A549细胞内钙激活蛋白43(Cap43)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的影响。方法用不同浓度的水不溶性二硫化三镍(Ni3S2)处理人肺癌A549细胞,24h后用间接免疫荧光法观察染毒后细胞内Cap43与HIF-1α蛋白表达的变化。结果通过细胞免疫荧光法发现,随着处理物浓度的增加,细胞内Cap43、HIF-1α蛋白含量均增加。结论不溶性镍化物可以诱导人肺癌A549细胞内Cap43、HIF-1α蛋白含量的增加。
- 高婷吴敏李超刘晓辉孙海燕王大庆刘云鹏姜又红
- 关键词：A549CAP43HIF-1Α
- 肾癌细胞和G250单克隆抗体复合物致敏树突状细胞肿瘤疫苗的制备
- 2012年
- 目的:以肾癌细胞和G250单克隆抗体(G250 monoclonal antibody,G250 mAb)复合物致敏树突状细胞(dendriticcells,DC)制备肾癌DC疫苗,并检测其活化水平,为临床应用DC肿瘤疫苗提供依据。方法:制备凋亡的肾癌细胞与G250mAb形成的复合物(G250 mAb IgG-complexed apoptotic tumor cell,IC-ATC)。取健康人新鲜外周血分离单个核细胞(peripheralblood mononuclear cell,PBMC),以GM-CSF和IL-4诱导PBMC成未成熟的树突状细胞(immature dendritic cells,iDC),将iDC分别负载凋亡肿瘤细胞(apoptotic tumor cell,ATC)、IC-ATC、G250 mAb,并均以TNF-α诱导成熟树突状细胞(mature dendriticcells,mDC),将未负载的DC作为对照组。流式细胞术检测各组mDC的免疫表型、ELISA试剂盒检测IL-12分泌水平,CCK-8法检测mDC刺激淋巴细胞增殖的能力。结果:成功制备IC-ATC致敏的DC疫苗。相对于负载ATC、G250mAb和未负载的DC,负载IC-ATC的DC疫苗显著上调CD86、CD80、CD83、HLA-DR的表达[(42.04±3.42)%vs(28.34±1.16)%、(33.77±1.61)%、(26.52±2.14)%,P<0.05;(38.17±2.55)%vs(23.79±2.41)%、(31.94±3.29)%、(24.32±3.23)%,P<0.05;(79.39±1.44)%vs(69.06±2.01)%、(74.49±1.35)%、(66.71±3.83)%,P<0.05;(35.52±2.72)%vs(26.90±2.82)%、(29.45±1.58)%、(27.42±2.11)%,P<0.05]和IL-12分泌水平(25.04 vs 5.27、13.32、7.53,P<0.05),且能更有效地刺激淋巴细胞增殖(4.02 vs 1.73、1.22、1.41,P<0.01)。结论:IC-ATC可有效促进DC成熟和活化,IC-ATC致敏的DC疫苗诱导淋巴细胞增殖能力显著增强。
- 孙海燕刘晓辉马楠王扬蒋涛刘云鹏姜又红
- 关键词：树突状细胞肾癌肿瘤疫苗
- ATC-IC致敏的树突状细胞诱导T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究
- 2012年
- 目的探讨凋亡的肾癌细胞与G250单克隆抗体(mAb)形成的复合物(ATC-IC)致敏树突状细胞(DC)后,DC对T淋巴细胞的激活、增殖作用及对肾透明细胞癌细胞的抑癌效应。方法制备凋亡的肾癌细胞与G250 mAb形成的复合物ATC-IC;分离健康供血者外周血单个核细胞及T淋巴细胞,联合应用粒—巨细胞集落刺激因子及白细胞介素从单个核细胞中培养出DC,以制备的ATC-IC刺激DC为实验组,以凋亡的肾癌细胞刺激DC和未经任何因素刺激的DC为对照组,检测各组DC对T淋巴细胞的细胞增殖动力学的影响,并用CCK-8测定诱导的细胞毒性T淋巴细胞对肾癌细胞株786-0和肺癌细胞株A549的杀伤活性。结果 ATC-IC致敏的DC诱导T淋巴细胞强烈的增殖反应,与对照组比较具有统计学差异(P<0.01);增殖后的T淋巴细胞对786-0的杀伤率明显高于对照组(P<0.05),而2组对A549细胞均无明显杀伤活性。结论经ATC-IC致敏的DC能诱导T淋巴细胞增殖,在体外可有效的诱导特异性抗肾癌效应。
- 孙海燕刘晓辉杨明花马楠刘云鹏姜又红
- 关键词：树突状细胞T淋巴细胞
- PSMA/4-1BBL共转染DC疫苗联合CIK细胞体外抑制前列腺癌的实验研究
- 2013年
- 目的:本研究通过复制缺陷性腺病毒介导的人前列腺特异性膜抗原基因(PSMA)和肿瘤坏死因子配体超家族成员(4-1BBL)体外共同转染树突状细胞(DC)后,与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养,观察其体外抑制前列腺癌的生物学效应。方法:将Ad-PSMA、Ad-4-1BBL、Ad-GFP按MOI=200∶1转染DC作为刺激细胞,分为共转染组、PSMA转染组、4-1BBL转染组、阴性对照组(Ad-GFP-DC组)以及未转染DC组,Western blot法检测各组DC细胞中PSMA和4-1BBL蛋白的表达;流式细胞仪分析CD80、CD83、CD86等表型变化;取患者外周静脉血单个核细胞中淋巴细胞用于CIK细胞的诱导培养,按DC∶CIK=1∶10比例将上述不同转染组DC加入CIK中,共同孵育96h(设普通DC刺激组和单独CIK细胞组为对照),收获的细胞作为效应细胞,流式细胞仪测定不同DC刺激组CIK细胞CD3、CD56表达率,ELISA法检测不同DC-CIK组培养上清IFN-γ、IL-10水平;PE-7AAD凋亡试剂盒检测不同DC-CIK组对人前列腺癌细胞株LNCap、Du145的细胞毒作用。结果:Western blot结果证实PSMA、4-1BBL可在DC上成功表达;各转染组DC表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR共刺激分子表达上调,与未转染组相比较差异显著(P<0.05)。培养14d,不同DC疫苗刺激组CIK以及单独CIK细胞组中CD3+、CD56+、CD3+/CD56+T细胞比例均高于培养7d的CIK,差异显著(P<0.05),其中经不同DC疫苗刺激的CIK组上升较单独培养14d-CIK组更明显(P<0.05)。DC-CIK培养上清中PSMA/4-1BBL-DC-CIK组IFN-γ分泌量最高,达1176.10±14.37pg/5×106cells,IL-10分泌量最低,为75.14±2.01 pg/5×106cells,与其他各组比较,差异显著(P<0.05)。不同组别DCCIK作用于LNCap、Du145细胞24h后,荧光显微镜下观察细胞凋亡和坏死明显。同一组别DC疫苗刺激下的CIK细胞对LNCap的杀伤作用强于DU145细胞,差异显著(P<0.05)。而在针对同一种肿瘤细胞时,PSMA/4-1BBL-DC-CIK组的杀伤作用最强,LNCap细胞的凋亡率可达(24.56±1.68)%,Du145细胞凋
- 隋承光杨明花孟繁东王帅孙海燕刘晓辉王扬
- 关键词：4-1BBL基因
