张乐之
- 作品数：5 被引量：8H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 基于荧光强度快速判断蛋白可溶性方法的建立
- 2012年
- 目的:建立一种通过观察荧光强度,快速、直观地判断蛋白可溶性的方法。方法:选择抗辐射蛋白CBL502-AA及其突变体CBL502-ΔAA′作为目的蛋白,增强型绿色荧光蛋白作为报告分子,分别构建融合蛋白表达载体;通过SDS-PAGE和荧光观察两种手段检测和比较融合蛋白的可溶性。结果:荧光观察融合蛋白的可溶性与SDS-PAGE检测结果一致。结论:建立了一种基于荧光强度,快速、简单、直观的比较蛋白可溶性的方法。
- 肖丽霞叶丙雨王洋师明磊何彰华张乐之赵玉军赵志虎
- 关键词：荧光绿色荧光蛋白
- 应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体被引量：1
- 2011年
- 目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。
- 何彰华师明磊王洋叶丙雨黄芬张彦范秋声王东肖丽霞张乐之李德彬闫兴赵志虎
- 关键词：RED重组质粒红霉素
- 环式增强型绿色荧光蛋白热稳定性及Npu DnaE内含肽高反式剪接效率研究被引量：1
- 2012年
- 目的在体内借助Npu DnaE内含肽(intein)的高效反式剪接作用获得环式增强型绿色荧光蛋白(Cyc-EGFP)。方法对构建的融合表达载体pET/Npu DnaE intein/EGFP-28a(+)进行诱导、表达,之后利用亲和纯化获得高纯度的Cyc-EGFP和增强型绿色荧光蛋白(EGFP),并对二者的荧光强度和热稳定性进行比较。结果 NpuDnaE内含肽环化效率可达98%以上,明显优于Ssp DnaE内含肽,环化后的EGFP热稳定性提高了4～5℃。结论 Cyc-EGFP这一明显优势使蛋白环化在蛋白质工程等领域具有重要的应用价值。
- 叶丙雨王政李德彬张乐之肖丽霞张部昌曹诚赵志虎
- 关键词：反式剪接热稳定性
- 人miR-139高效真核表达载体的构建及其功能初探
- 2012年
- 目的构建人miR-139高效真核表达载体,初步探究miR-139在乳腺癌ZR75-1细胞中的功能。方法设计成熟miR-139的PCR引物,扩增包含miR-139成熟序列的基因组序列。将扩增产物亚克隆到真核表达载体PIRES2-EGFP(IE)上,构建miR-139真核表达载体IE-139。将IE-139转染至乳腺癌ZR75-1细胞中,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139的表达情况,同时检测过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc、EIF4G2和ZBTB34的mRNA水平。结果酶切、测序结果表明,人miR-139真核表达载体构建成功;qRT-PCR表明,miR-139能在乳腺癌ZR75-1细胞中高效表达(P<0.01),过表达miR-139的乳腺癌ZR75-1细胞中c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),但ZBTB34的下降水平不明显。结论成功构建了人miR-139真核表达载体IE-139,通过qRT-PCR检测,证明该载体能成功实现miR-139的高效过表达,并且miR-139能明显抑制乳腺癌ZR75-1细胞中癌基因c-Myc和EIF4G2的mRNA表达水平,这为进一步研究miR-139的功能及调控靶基因的分子机制奠定了基础。
- 张乐之张彦李德彬叶丙雨肖丽霞赵玉军赵志虎
- 关键词：真核表达载体QRT-PCR癌基因
- 组成新发典型甲型H1N1流感病毒8个基因片段的变异性分析与疫病流行原因初探被引量：6
- 2009年
- 为探索新近暴发的甲型H1N1流感病毒各基因片段的变异性与本次疫病流行的内在原因,以NCBI GenBank中报道的1株新发的典型H1N1甲型流感病毒A/New York/1669/2009(H1N1)作为研究对象,运用在线BLAST和CLUSTAL X等生物信息学软件对其PA、NP、M、PB1、PB2、NA、HA和NS基因片段进行了比较分析。结果表明,新发甲型H1N1流感毒株的PB1、NP基因来源于人源谱系流感病毒,HA、NA、NS、M基因来源于猪源谱系流感病毒,PB2和PA基因来源于禽源谱系流感病毒。此外,新发甲型H1N1流感病毒的HA和NA分别在第249和386位新出现1个"-NTT-"、"-NFSI"-的糖基化位点。HA的6个潜在抗原决定簇中有3个发生了氨基酸序列改变,NA则是12个中有5个发生了改变。表明,这些抗原基因的大范围重组与高频率变异可能是造成这次流感暴发与大规模流行的根本原因。
- 姚碧陈海龙刘琨张乐之赵玉军马兴元
- 关键词：甲型H1N1流感病毒基因片段
