张艳丽 作品数:7 被引量:17 H指数:3 供职机构: 滨州医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 山东省自然科学基金 山东省高等学校科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
以链球菌制剂OK432为佐剂的内皮细胞疫苗体内抗小鼠肝癌转移的作用(英文) 被引量:1 2015年 目的评估OK432作为佐剂制备的内皮细胞疫苗体内抗肿瘤转移的作用。方法以OK432为佐剂,体外混合人脐静脉内皮细胞(HUVEC),制备HUVEC-OK432疫苗。雄性健康BALB/c小鼠尾静脉注射肝癌细胞5×105建立肝癌肺转移模型,皮下注射HUVEC-OK432疫苗,分别在预防性和治疗性免疫中评价HUVEC-OK432疫苗抗肿瘤转移活性;皮内注射5×104肝癌细胞建立皮内肿瘤血管模型,皮下注射HUVEC-OK432疫苗,评价HUVEC-OK432疫苗抑制肿瘤新生血管的活性;采用ELISA的方法测定小鼠免疫血清中HUVEC抗体水平;采用细胞毒T淋巴细胞(CTL)实验考察HUVEC-OK432疫苗诱导的细胞免疫应答水平。结果肺转移模型结果显示,在预防性和治疗性免疫中,HUVEC-OK432免疫均能有效降低小鼠肺上的肿瘤转移灶数目(P<0.01);皮内肿瘤血管模型的结果显示,HUVEC-OK432免疫能显著降低肿瘤新生血管的数目(116.5±20.6 vs 45.0±8.9,P<0.01);ELISA测定抗体的结果显示,HUVEC-OK432初次免疫后1周小鼠即产生了高滴度的特异性HUVEC抗体,随免疫次数的增加抗体水平不断升高,且该抗体在体外可以显著抑制HUVEC细胞的增殖;CTL实验的结果表明,HUVEC-OK432免疫组淋巴细胞体外有明显的特异性杀伤HUVEC的作用。结论 HUVEC-OK432疫苗免疫可以有效诱导小鼠产生靶向内皮细胞的免疫应答,从而有效抑制小鼠肝癌细胞转移。 徐茂磊 张艳丽 周玲 张静 姚庆收 杨小平关键词:脐静脉内皮细胞 整合素β1亚基对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响 被引量:3 2016年 目的分析幽门螺杆菌感染胃上皮细胞过程中整合素β1亚基表达的变化,观察整合素β1对幽门螺杆菌感染胃上皮细胞GES-1凋亡及增殖的影响。方法将幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养,采用流式细胞术检测整合素β1的表达量变化;应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1中β1亚基的表达;幽门螺杆菌感染胃上皮细胞及iRNA降低β1的表达后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡,采用CCK-8法检测细胞增殖情况。结果幽门螺杆菌感染胃上皮细胞12、24、48h后空白对照组凋亡率分别为(10.80±0.71)%、(12.23±0.06)%和(12.30±2.12)%,Hp感染组凋亡率分别为(24.20±0.14)%、(30.05±2.47)%和(26.40±1.91)%,差异均有统计学意义(t值分别为-26.28、-7.701和-12.855,P<0.05);与幽门螺杆菌共培养6、24、48h胃上皮细胞增殖受到抑制,抑制率分别为(35.00±3.22)%、(40.96±2.45)%和(8.00±3.33)%;幽门螺杆菌与胃上皮细胞GES-1共培养24、48h流式细胞术检测整合素β1表达,空白对照组平均荧光强度(MFI)分别为(1616.33±24.70)和(1834.67±17.01),Hp感染组为(1484.00±60.89)和(1376.00±14.11),差异有统计学意义(t值分别为3.488和35.95,P<0.05);应用iRNA技术降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基表达24、48h,对照组凋亡率分别为(18.75±3.59)%和(39.75±3.68)%,iRNA组凋亡率分别为(26.25±4.11)%和(55.30±5.57)%,差异有统计学意义(t值为-2.746和-4.656,P<0.05);胃上皮细胞中β1亚基的表达降低后细胞增殖受到抑制,24、36、48、72h抑制率分别为(6.16±1.07)%、(17.15±2.76)%、(10.84±1.34)%和(21.87±1.72)%。结论幽门螺杆菌能降低胃上皮细胞GES-1整合素β1亚基的表达,而且可能通过降低整合素β1亚基的表达促进上皮细胞GES-1的凋亡并抑制其增殖。 陈醒醒 张莹 孙辉 李娇娇 张艳丽 李波清关键词:整合素Β1 胃上皮细胞 幽门螺杆菌 IRNA 分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析 被引量:2 2016年 目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用。利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建Hp Hsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸。结果构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238。结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能。这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础。 赵慧琳 季晓飞 张艳丽 柏雪莲 李娇娇 陈醒醒 张玉梅 李波清关键词:幽门螺杆菌 尿素酶 HSP60 分子伴侣 相互作用 CRM197修饰的肿瘤细胞裂解物疫苗抗肝癌作用研究 2015年 [目的]探讨CRM197能否增强H22肝癌细胞裂解物疫苗的抗肿瘤活性。[方法]反复冻融H22细胞制备裂解物,与CRM197偶联,制备H22-CRM197疫苗,以小鼠皮下移植瘤模型考察疫苗抗肿瘤活性,并对免疫学机制进行探讨。[结果]与PBS组相比,H22-CRM197免疫显著降低了荷瘤小鼠肿瘤重量(0.53±0.20 g VS 2.04±0.43 g,p<0.01);与PBS组比较,H22-CRM197组小鼠免疫血清中检测到高滴度的抗-H22抗体(p<0.01);H22-CRM197免疫能够有效地刺激脾淋巴细胞的增殖并诱导产生了明显靶向H22细胞的细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用。[结论]CRM197可以显著增强H22肝癌细胞裂解物疫苗的抗肿瘤活性。 张艳丽 司春枫 张玉梅 赵慧琳 徐茂磊 李波清关键词:肝癌 幽门螺杆菌感染对LAIR-1影响的实验研究 被引量:4 2015年 目的通过构建小鼠感染模型,研究幽门螺杆菌(Hp)感染对白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)表达的影响。方法将32只C57BL/6小鼠随机分为对照组和感染组。感染组通过Hp菌液灌胃建立小鼠感染模型,对照组以PBS灌胃。6周后处死小鼠,采用胃黏膜分离培养、革兰染色、PCR及生化反应检查Hp定植情况,采用流式细胞术检测小鼠外周血单个核细胞(PBMC)中单核细胞和淋巴细胞表面LAIR-1的表达。结果感染组小鼠Hp感染率为91.3%(21/23)。感染组和对照组小鼠PBMC中单核细胞比例分别为(22.85±3.56)%和(49.85±0.35)%,淋巴细胞比例分别为(40.93±10.05)%和(30.15±0.35)%,差异均有统计学意义(t=5.845和2.137,P<0.05)。感染组和对照组小鼠PBMC表面LAIR-1表达率分别为(70.16±7.75)%和(83.4±0.1)%,淋巴细胞表面LAIR-1表达率分别为(56.81±11.37)%和(72.3±0.6)%,差异均有统计学意义(t=3.761和2.491,P<0.05)。结论 Hp感染下调了小鼠PBMC中单核细胞及LAIR-1的表达,上调淋巴细胞比例但下调其LAIR-1的表达。 孙辉 杜东龙 张莹 张艳丽 陈醒醒 李波清关键词:幽门螺杆菌 C57BL/6小鼠 基因敲除质粒载体的构建及其在幽门螺杆菌基因敲除中的应用 被引量:5 2016年 目的构建用于幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)同源重组双交换基因敲除的质粒载体,实现Hp内基因的快速敲除。方法以质粒pLYL03为骨架,重新排列质粒上的基因元件以减少冗余序列,用卡那霉素抗性基因(aphA)替换原质粒上的红霉素抗性基因作为抗性筛选标记,在抗性筛选标记两端构建多克隆位点用于同源重组同源臂的插入,由此构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK。以质粒pSJHK为载体构建hp0169基因的同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,通过电击转化方法将敲除质粒pSJHK-0169转入Hp中,用卡那霉素筛选转化子。结果以质粒pLYL03为基础构建用于Hp同源重组双交换基因敲除的质粒载体pSJHK,大小4 371bp。以基因hp0169作为目标基因构建同源重组双交换敲除质粒pSJHK-0169,经电击转化Hp中,获得卡那霉素抗性阳性转化子,测序确证基因敲除成功。结论构建的基因敲除质粒载体pSJHK实现了对Hp中目标基因的敲除,为Hp新基因功能研究和致病因子的发掘提供了有效的基因操作工具。 季晓飞 赵慧琳 张莹 柏雪莲 张艳丽 荣倩玉 李波清关键词:幽门螺杆菌 基因敲除 质粒 同源重组 华支睾吸虫parkin蛋白的分子生物学特征研究 被引量:3 2016年 目的了解华支睾吸虫Parkin蛋白(Clonorchis sinensis Parkin)的生物学特性。方法从华支睾吸虫cDNA文库获得Parkin的cDNA全长,NCBI搜索与之相似度高的基因序列,预测其所含结构域和功能;应用MEGA5程序对来自GenBank中与之有较高相似度的基因序列进行分析,构建基因进化树;原核表达重组融合蛋白CsParkin,纯化后免疫Blab/c小鼠,获得多克隆抗体,采用Western blot鉴定天然CsParkin;采用qRT-PCR测定CsParkin基因在不同发育阶段的表达水平。结果 CsParkin蛋白含有5个结构域,分别是Ubl、RING0、RING1、IBR和RING2,具有典型的Parkin蛋白结构;该蛋白与人及各种动物的Parkin有很高的相似度,与其他吸虫有更近的进化关系;Western blot显示原核表达的重组CsParkin,与天然CsParkin分子质量相同,均为45.7ku;CsParkin在囊蚴中的表达量高于成虫;免疫组化显示CsParkin主要分布于成虫受精囊中的精子及口吸盘和睾丸,在囊蚴中广泛分布。结论肝吸虫CsParkin属蛋白于保守蛋白,具有典型的泛素连接酶3的功能结构,推测其在蛋白的泛素化中起到作用,可能在华支睾吸虫的生长过程中发挥作用。 柏雪莲 李波清 张玉梅 张艳丽 耿丽 杜镇镇 赵慧琳关键词:华支睾吸虫 PARKIN 泛素连接酶