柏雪莲
- 作品数：35 被引量：160H指数：7
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- 抗弓形虫单克隆抗体的制备与鉴定
- 目的:制备抗弓形虫全抗原、天然P30、重组P30的单克隆抗体(mAb),为抗原提纯、弓形虫病诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础。方法:用弓形虫全抗原、天然P30、重组P30分别免疫BALB／c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,...
- 魏庆宽李瑾付婷霞张佃波崔勇柏雪莲付斌刘玉冰王洪法宰德福黄炳成韩广东刘克义
- 关键词：弓形虫
- 文献传递
- 1995~2004年鲁南丝虫性乳糜尿及象皮肿病例资料分析
- 2006年
- 目的了解鲁南慢性丝虫性乳糜尿、象皮肿病例的发病特点，为做好慢性丝虫性乳糜尿、象皮肿患者的照料救治工作奠定基础。方法对1995—2004年10年间确诊的504例晚期丝虫病住院病例资料进行整理、统计分析。结果504例晚期丝虫病住院患者，以枣庄、济宁、临沂三地市居多；年龄13-87岁，60-组最多；农民最多，占89．29％，多为文盲和小学文化程度；病程1月-60年，20年-组患者最多。乳糜尿428例，女性偏多（53．9r7％）；象皮肿76例，男性偏多（61．84％）；病变发生在右下肢最多，占51．32％，轻中度病情较多，占72．37％。血总蛋白〈60g/L异／L者占43．33％，其中乳糜尿患者占90．77％；Hb〈120g／L者48．10％，乳糜尿患者占87．92％；乳糜定性试验阳性者93．46％，尿蛋白定量1—5g／L者最多，占75．93％。428例乳糜尿住院患者。均采用中西医结合辨证施治，312例30d内即时治愈出院；76例象皮肿患者，61例于50d内基本治愈或显效出院。结论慢性丝虫病患病率已处于较低水平，当务之急是积极探索理想的治疗方法及措施，治疗慢性丝虫病患者，减轻患者症状或体征，提高其生活质量。
- 魏庆宽曹健徐秀来付婷霞柏雪莲李瑾崔勇王用斌
- 关键词：丝虫病乳糜尿象皮肿
- 抗弓形虫感染DNA疫苗的研究
- 目的研究一廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因的引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2...
- 魏庆宽李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇王用斌张佃波王洪法付斌刘玉冰宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护作用
- 文献传递
- 微小隐孢子虫CP23基因真核表达载体pcDNA3.0-23的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建微小隐孢子虫CP23真核表达载体pcDNA3.0-23。方法提取微小隐孢子虫基因组DNA,PCR扩增CP23基因片段,然后克隆至TA载体,通过PCR、酶切及测序鉴定后,将CP23基因片段用限制性内切酶切下,克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建pcDNA 3.0-23重组质粒。通过PCR、酶切对重组质粒pcDNA3.0-23进行鉴定。结果扩增出约340 bp的微小隐孢子虫CP23基因片段,并成功构建微小隐孢子虫CP23真核表达载体pcDNA3.0-23。结论微小隐孢子虫CP23真核表达载体pcDNA3.0-23的构建为微小隐孢子虫的基因疫苗研制奠定了基础。
- 张玉梅李波清柏雪莲杨海霞张珍耿丽
- 关键词：微小隐孢子虫基因疫苗
- 弓形虫ROP2核酸疫苗免疫保护作用的研究被引量：22
- 2006年
- 目的研究ROP2核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法42只BALB/c小鼠随机分为3组:实验组、空质粒组和PBS对照组,各组小鼠分别肌注pc-DNA3-ROP2重组质粒50μg、pc-DNA3空质粒50μg和PBS50μl,共免疫3次,每次间隔3周,末次接种量均加倍。末次免疫后2周,各组分别取4只小鼠的血清、脾和淋巴组织,检测CD4+、CD8+及各细胞因子。其余各组每鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子500个,观察其存活时间等。结果ROP2核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,小鼠血清抗体滴度高并能识别由基因重组体外诱导表达的ROP2蛋白抗原;实验组小鼠的CD4+T细胞增殖明显(69.5±3.4)%、CD4+/CD8+比值显著升高(4.69±1.32)%(P<0.01);其脾、淋巴结细胞培养液及血清中白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-12、γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF)均有不同程度的升高,尤其是血清中升高最为显著。弓形虫攻击感染180h后,实验组小鼠免疫保护率为88.9%,与对照组相比,小鼠存活时间明显延长、初始死亡时间明显推迟(P<0.01)。结论ROP2核酸疫苗具有较强的免疫原性,能产生良好的免疫保护作用。
- 魏庆宽李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇张佃波王洪法刘玉冰付斌宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护
- 弓形虫ROP2基因的克隆与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的体外扩增弓形虫棒状体分泌抗原2(ROP2)靶基因,构建真核表达载体pc-DNA3-ROP2。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据基因库ROP2基因序列设计合成1对引物,应用PCR扩增ROP2基因片段,回收纯化后克隆入TA载体质粒pUCm-T;用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切该重组子,将切下的ROP2基因在T4DNA连接酶作用下插入真核细胞表达载体质粒pc-DNA3,并进一步作双酶切、PCR及测序鉴定。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7kbROP2基因片段,克隆于pUCm-T载体中,再将ROP2基因亚克隆于真核表达载体质粒pc-DNA3,经筛选鉴定,构建pc-DNA3-ROP2重组质粒;测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。结论弓形虫ROP2基因片段,经TA克隆及亚克隆,构建弓形虫pc-DNA3-ROP2重组质粒。
- 魏庆宽张佃波李瑾李桂萍王洪法崔勇柏雪莲付斌刘玉冰宰德富黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：弓形虫克隆基因重组
- 分子伴侣幽门螺杆菌Hsp60与UreB的相互作用分析被引量：2
- 2016年
- 目的检测并分析幽门螺杆菌(Hp)尿素酶β亚基(UreB)与Hsp60之间的相互作用。方法克隆Hp 26695的尿素酶β亚基基因(UreB)融合GST标签和Hsp60基因融合His标签,分别在大肠埃希菌中进行异源表达。提取两种蛋白,采用pull-down方法检测两者间的相互作用。利用Modeller 9v2软件,以E.coli的GroEL为基础模建Hp Hsp60的三维结构,再与已知的UreB结构利用AutoDock 4.2软件进行分子共模拟,分析二者的相互作用面和关键氨基酸。结果构建了Hp Hsp60和尿素酶β亚基(UreB)的大肠埃希菌异源表达体系并获得纯化蛋白;Pull-down试验显示部分未融合GST标签的Hsp60出现在GST-UreB的洗脱液中,表明Hsp60与GST-UreB之间存在相互作用;以E.coli的GroEL为基础模建了Hp Hsp60的三维结构,利用docking技术构建UreB与Hp Hsp60的相互作用模型,发现其主要的相互作用面位于Hsp60的α9与UreB的α2之间,其可能形成氢键的关键位点为UreB的α2上的T147氨基酸与Hsp60的α9上的E237、K238。结论 Hp Hsp60能直接与尿素酶β亚基(UreB)相互作用,Hsp60可能通过这种相互作用在UreB成熟过程中发挥分子伴侣功能。这为阐明Hp尿素酶的组装与成熟机制奠定了基础。
- 赵慧琳季晓飞张艳丽柏雪莲李娇娇陈醒醒张玉梅李波清
- 关键词：幽门螺杆菌尿素酶HSP60分子伴侣相互作用
- 敲除pck A基因的结核杆菌引起的免疫反应的研究被引量：4
- 2005年
- 研究结核杆菌pckA基因编码的磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)诱导机体产生的保护性免疫反应。用敲除pckA基因的牛结核杆菌BCG和野生型BCG分别感染小鼠,取肝、肺、脾进行病理分析,并进行脾细胞培养,检测CD4+、CD4+/CD8+、细胞因子IFNI-γI、L-12和TNF等。用敲除pckA基因的BCG感染的小鼠比野生型BCG感染的小鼠体内产生的结核结节少且不典型,炎性程度低。野生型BCG感染的小鼠脾脏内的CD4+T细胞和CD4+/CD8+、细胞因子IFN-γ、IL-12、TNF均明显高于敲除pckA基因BCG感染的小鼠。pckA基因为结核杆菌生长所必需,其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应,是一种很好的疫苗候选分子。
- 柏雪莲刘克义于进芝李桂萍李瑾魏庆宽韩广东崔勇
- 关键词：结核杆菌细胞因子免疫反应
- 抗弓形虫感染DNA疫苗的研究
- 目的:研究一廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法:收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因的引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增RO...
- 魏庆宽张佃波李瑾傅婷霞柏雪莲崔勇王洪法付斌刘玉冰宰德福黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护作用
- 文献传递
- 结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究被引量：2
- 2009年
- 目的初步研究结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)的免疫作用。方法用敲除pckA基因的卡介苗(BCG△pckA)和野生型卡介苗(BCG-WT)分别感染小鼠,取肺脏进行病理分析;取脾脏用流式细胞仪检测CD4+、CD8+T细胞、CD4+/CD8+,酶联免疫吸附试验检测IL-12;取脾脏进行结核杆菌的培养,比较两组菌落数量。结果BCG△pckA感染的小鼠比BCG-WT感染的小鼠肺脏内产生的结核结节少且不典型,炎性程度低;BCG-WT感染的小鼠脾脏内的CD4+T细胞和CD4+/CD8+及IL-12滴度明显高于BCG△pckA感染的小鼠;BCG△pckA株形成菌落的数量明显低于BCG-WT株形成菌落的数量。结论pckA基因为结核杆菌生长所必需,其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应,可能是一种很好的疫苗候选分子。
- 柏雪莲王志强刁兴华张珍刘春会郭立东
- 关键词：结核杆菌免疫保护
