王亚明
- 作品数：5 被引量：20H指数：2
- 供职机构：蚌埠医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：安徽省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 野生型及突变型人血管内皮生长因子A真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:构建人野生型和c.454C>T突变型血管内皮生长因子A(VEGFA)真核表达载体。方法:采用反转录聚合酶链反应扩增人VEGFA基因,用限制性核酸内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切后连接真核表达载体pEGFP-N1,构建野生型VEGFA真核表达载体(野生型pEGFP-VEGFA),通过双酶切和测序进行鉴定。采用定点诱变PCR技术构建c.454C>T突变型人VEGFA真核表达载体(突变型pEGFP-VEGFA),同样通过双酶切和测序进行鉴定。结果:野生型和突变型pEGFP-VEGFA被双酶切为4 697 bp和1 251 bp两条条带。测序结果证实野生型pEGFP-VEGFA VEGFA序列与GenBank公布的VEGFA mRNA序列完全一致,突变型pEGFP-VEGFA除第454位碱基C被T替代以外,其余序列与野生型完全一致。结论:成功构建了野生型和突变型pEGFP-VEGFA,为下一步研究VEGFA基因功能提供参考。
- 吴勇刘学刚郭嘉诚李慧敏宋伟丁周志王亚明赵武徐家丽
- 关键词：分子遗传学血管内皮生长因子A重叠延伸PCR定点突变
- 野生型及c.454C>T突变型人血管内皮生长因子A基因重组真核表达载体的体外表达
- 2015年
- 目的:探讨野生型和c.454C>T突变型人血管内皮生长因子A(VEGFA)基因重组真核表达载体(p EGFP-VEGFA)体外表达有无差异。方法:用脂质体法将野生型和突变型p EGFP-VEGFA转染人胚胎肾细胞(HEK293T),采用荧光显微镜观察重组载体VEGFA和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的融合蛋白的表达,以实时荧光定量PCR法检测VEGFA mRNA的表达。结果:在经转染的HEK293T细胞内观察到绿色荧光,转染后48 h突变型p EGFP-VEGFA转染组荧光强度低于野生型p EGFPVEGFA转染组。突变型p EGFP-VEGFA转染组VEGFA mRNA表达明显低于野生型p EGFP-VEGFA转染组(P<0.01)。结论:在HEK293T细胞中,初步表明VEGFA突变体导致VEGFA mRNA和蛋白的表达水平均下调,为进一步研究VEGFA c.454C>T突变体在先天性左心室流出道病变发生中的作用奠定了基础。
- 吴勇刘学刚赵武徐家丽郭嘉诚李慧敏丁周志王亚明宋伟
- 关键词：血管内皮生长因子A突变实时荧光定量聚合酶链反应
- 过敏性紫癜并肺炎支原体感染患儿免疫球蛋白和补体的研究被引量：15
- 2013年
- 目的检测过敏性紫癜(HSP)合并肺炎支原体(MP)感染的患儿血清免疫球蛋白及补体的水平,探讨MP感染与HSP的体液免疫学关系。方法研究对象为55例HSP患儿,检测MP-IgM抗体,分为MP-IgM阳性组20例、MP-IgM阴性组35例,并以20名正常儿童作为对照组。采用全自动生化分析仪检测血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG、IgE及补体C3、C4。结果 HSP患儿MP感染阳性率达36.36%,合并MP感染的患儿临床症状更严重。与正常对照组相比,MP-IgM阴性组IgA、IgE明显增高(P<0.01),C3水平降低(P<0.05),同时IgE明显高于MP-IgM阳性组(P<0.01),IgG、IgM、C4无明显变化。MP-IgM阳性组与正常对照组相比,IgA增高,IgM、C3、C4水平降低,且其中IgM、C3低于MP-IgM阴性组,差异均有统计学意义(P<0.05),而IgG、IgE水平无明显改变。结论在HSP儿童中有较高MP感染率,所有HSP患儿存在血清IgA增高及C3水平降低,说明体液免疫参与HSP的发病。伴MP感染的HSP患儿体液免疫功能更加紊乱,表现在C4水平下降,IgM、C3明显低于MP-IgM阴性组,IgE增高仅见于MP-IgM阴性组,提示MP感染的HSP患儿可能更多伴有低补体血症的自身免疫紊乱参与,说明MP感染引起的免疫紊乱可能在HSP发生、发展中具有重要作用。
- 夏群丁周志王亚明徐家新周瑞陈兰举
- 关键词：过敏性紫癜肺炎支原体感染免疫球蛋白补体
- 重症手足口病患儿危险因素分析被引量：3
- 2021年
- 目的观察重症手足口病(HFMD)患儿的主要实验室检测结果,寻找重症HFMD的危险因素并建立预测模型,为早期诊断、及时治疗提供帮助。方法选取2019年1—12月蚌埠医学院第一附属医院收治的HFMD患儿(包括临床诊断病例和确诊病例)为研究对象,分析临床症状、体征及主要的实验室指标,差异有统计学意义项进行多因素logistic回归分析,构建回归模型,绘制ROC曲线评估模型预测效果,使用SPSS 26.0统计学软件进行数据分析。结果通过分析109例(其中轻型41例,重症68例)HFMD患儿的临床资料发现,体温≥38.9℃(OR=2.943,95%CI:1.099~7.884)、精神差(OR=5.899,95%CI:2.130~16.339)、外周血白细胞升高(OR=4.386,95%CI:1.420~13.541)、脑电图异常(OR=4.502,95%CI:1.714~11.821)为重症HFMD的独立危险因素(依次用X_(1)、X_(2)、X_(3)、X_(4)表示),预测模型的回归方程为Logit(P)=-2.893+1.079X_(1)+1.775X_(2)+1.478X_(3)+1.504X_(4),该模型灵敏度为61.0%,特异度为83.8%,绘制ROC曲线对应的曲线下面积(AUC)为0.843,95%CI为0.768~0.917。结论体温≥38.9℃、精神差、外周血白细胞升高、脑电图异常为重症HFMD的独立危险因素,可构建预测HFMD重症的logistic回归模型。
- 王瑾王瑾彭万胜周瑞王亚明
- 关键词：手足口病重症儿童
- VEGFA基因重组真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建VEGFA基因重组真核表达载体pEGFP-VEGFA,并检测其在人胚胎肾细胞(HEK293T)中的表达。方法以人脐血单核细胞的RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增VEGFA基因,并将其定向插入真核表达载体pEGFP-Nl中,构建重组真核表达载体pEGFP-VEGFA。经限制性核酸内切酶BglII和SalI酶切和DNA测序鉴定后,用脂质体法将pEGFP-VEGFA转染HEK293T细胞,转染后24 h和48 h采用荧光显微镜观察pEGFP-VEGFA的表达。结果 pEGFP-VEGFA被双酶切为4 697 bp和1 251 bp两条条带,测序结果证实VEGFA序列与GenBank公布的VEGFA mRNA序列完全一致。在经转染的HEK293T细胞内观察到较强的绿色荧光,表明pEGFP-VEGFA成功转染HEK293T细胞,并在其中得到了表达。结论成功构建重组真核表达载体pEGFP-VEGFA,为进一步研究VEGFA基因的生物学功能奠定了基础。
- 吴勇刘学刚郭嘉诚李慧敏丁周志王亚明宋伟徐家丽赵武
- 关键词：血管内皮生长因子A基因
