刘正芳
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：武汉市普爱医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝再生增强因子在β-淀粉样肽(25-35)诱导PC12细胞中的表达研究
- 刘正芳王建明王岚曾晓云熊玲
- 重组大鼠肝再生增强因子原核表达载体构建及多克隆抗体制备被引量：2
- 2010年
- 背景:国外有1篇文献报道了肝再生增强因子在中枢神经系统内的分布与表达。由于关于重组大鼠肝再生增强因子蛋白多克隆抗体制备、鉴定及原核表达载体如何构建的相关文献较少,国内对于其在中枢神经系统的研究目前未见报道。目的:利用大肠杆菌BL21表达大鼠肝再生增强因子融合蛋白,并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:提取SD大鼠海马组织RNA,构建原核表达重组质粒pET28a-ALR并转化到宿主菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收,4次免疫日本大耳白兔后,心脏取血,吸取血清作为多克隆抗体,以ELISA测定抗体血清效价,Western-blotting检测抗体的特异性和亲和性。观察:①原核表达重组质粒pET28a-ALR构建。②pET28a-ALR重组体酶切鉴定。③ELISA及Western-blotting检测结果。结果与结论:双酶切电泳检测结果显示得到了预期条带,其大小分别为5.3kb和0.4kb,经核苷酸序列分析证明成功构建了pET28a-ALR原核表达载体。成功获得分子质量约为19ku纯化的融合蛋白。ELISA测定显示多克隆抗体效价可达到1∶2000,说明抗体与纯化的重组肝再生增强因子蛋白具有良好的反应性,有较高的效价,可满足实验的要求。通过Western-blotting检测证明该抗体可以特异性识别肝再生增强因子蛋白。实验成功地利用原核表达体系表达了肝再生增强因子融合蛋白,并制备、纯化了抗肝再生增强因子蛋白的多克隆抗体,经鉴定能够满足针对肝再生增强因子免疫印迹检测的实验要求。
- 刘正芳王建明王岚曾晓云熊玲罗志秀伍俊伊
- 关键词：肝再生增强因子原核表达多克隆抗体
- 肝再生增强因子在β-淀粉样肽(25-35)诱导PC12细胞中的表达
- 2011年
- 目的观察肝再生增强因子(ALR)在β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25-35)诱导PC12细胞阿尔茨海默病(AD)体外模型中的表达。方法体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,分为实验组和空白对照组,实验组用终浓度为25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞建立AD细胞模型,MTT法测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测ALR mRNA表达变化、Western印迹法检测ALR蛋白表达变化。结果 Aβ25-35组中PC12细胞的存活率较对照组明显降低(P<0.05),细胞凋亡率也明显增高(P<0.05),ALR mRNA在Aβ25-35组中表达较对照组明显降低(P<0.05),W estern印迹法检测其蛋白表达也较对照组下降(P<0.05)。结论 ALR在Aβ25-35诱导PC12细胞致AD模型中表达减少,可能与AD的发生发展有关。
- 刘正芳王建明王岚曾晓云熊玲罗志秀伍俊伊
- 关键词：Β-淀粉样肽(25-35)PC12细胞阿尔茨海默病肝再生增强因子
- 重组大鼠肝再生增强因子原核表达载体构建及多克隆抗体制备
- 刘正芳王建明王岚曾晓云熊玲
- 胰岛素抵抗与帕金森病痴呆的相关性研究被引量：7
- 2013年
- 目的:探讨胰岛素抵抗(IR)对帕金森病(PD)患者发生痴呆的影响。方法:收集141患者进行空腹血糖、空腹胰岛素以及葡萄糖耐量试验(OGTT)测定,采用HOMA法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并应用相关量表对PD患者运动及认知功能障碍程度进行评估,比较分析帕金森病痴呆患者的胰岛素抵抗情况,并应用Logistic回归模型进行分析。结果:141例患者中60例(42.6%)为帕金森病痴呆,其中约63.3%的患者存在IR,明显高于非痴呆帕金森病患者(30.9%)(P<0.05);且在胰岛素抵抗型的PD患者中其痴呆发生率、HOMA-IR、UPDRSⅢ评分以及Hoehn-Yahr分级均明显高于非胰岛素抵抗组(P<0.05);多因素Logistic回归分析发现,IR为PD患者发生痴呆的危险因素(OR=1.550,P=0.004)。结论:IR是PD患者发生痴呆的危险因素之一。
- 伍俊伊王岚刘正芳
- 关键词：帕金森病痴呆症胰岛素抵抗
- 沙鼠前脑缺血再灌注后脑组织HSP20和EPO的表达变化及相关性被引量：2
- 2011年
- 目的观察沙鼠前脑短暂性缺血再灌注后,HSP20与EPO在脑组织中的表达,探讨二者的相关性和保护机制,并评估它们的临床应用前景。方法 45只健康雄性蒙古沙鼠随机分为三组:正常对照组、假手术组和脑缺血再灌注组,其中假手术组和脑缺血再灌注组又分为4个亚组:6 h组,1 d组,3 d组和7 d组。予以夹闭双侧颈总动脉并再通造成脑缺血再灌注模型。HE染色观察沙鼠前脑组织的病理变化。免疫组织化学染色观察HSP20和EPO的表达情况。结果 HE染色:正常对照组和各假手术组的沙鼠前脑组织形态结构没有明显的变化;脑缺血再灌注组根据时间点的不同可见胶质细胞肥大、增生,细胞和细胞间质水肿,神经元坏死。免疫组化染色:与对照组及假手术组相比,缺血再灌注损伤后HSP20及EPO的表达均上调,于第三天达到高峰,后开始下降至7 d时仍高于正常组和假手术组(P<0.05),且两者的表达趋势相同呈正相关(r=0.777,P<0.05)。结论缺血再灌注的沙鼠脑组织中HSP20及EPO表达均升高并可能减轻缺血再灌注所导致的脑损伤。
- 周洁王建明王岚曾晓云熊玲罗志秀刘正芳
- 关键词：脑缺血再灌注EPO
