高锦伟
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- 甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体轻链和重链可变区基因的巢式PCR扩增及序列分析
- 2013年
- 目的:采用巢式PCR对甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链基因进行扩增,对获得的基因进行序列分析,并找出克隆鼠Igκ轻链和重链可变区基因的通用方法。方法:设计22对扩增鼠Igκ轻链可变区和重链可变区基因的引物,对6株鼠抗人甲型H1N1流感病毒血凝素单克隆抗体的轻链和重链可变区基因进行克隆并测序,与NCBI公布的鼠免疫球蛋白序列比对分析。结果:巢式PCR方法可以有效避免单克隆抗体克隆过程的假基因,并且得到的单克隆抗体的氨基酸序列均符合鼠免疫球蛋白可变区特征。结论:建立了克隆鼠免疫球蛋白轻链和重链可变区基因的通用方法,为后期克隆鼠源性单克隆抗体的可变区基因提供了基础,并为研究甲型H1N1流感病毒血凝素与抗体的结合位点提供了实验数据。
- 李慧瑾李研孙晶莹高锦伟赵向绒封青谭天天胡巧侠李元胡军
- 关键词：甲型H1N1流感病毒可变区巢式PCR
- 运用单克隆抗体分析流感病毒H1亚型HA蛋白的抗原表位被引量：5
- 2012年
- 目的对甲型流感病毒H1亚型血凝素蛋白的抗原表位进行分析。方法以前期获得的97株抗H1亚型HA抗原的单克隆抗体为研究工具,用间接ELISA方法对不同亚型的血凝素抗原进行反应,将H1亚型HA蛋白的抗原表位进行粗分类,用ELISA阻断试验对抗原表位进行细分类。选取两类抗原表位的抗体,通过计算机模拟分析抗体与抗原结合的结构域,推测抗体结合的具体氨基酸位点。结果根据抗体的交叉反应性不同,将流感病毒H1亚型的HA的抗原表位分为8类;根据ELISA阻断试验的初步结果,H1亚型HA抗原的抗原表位又被细分为15类,通过计算机模拟分析预测的抗体与流感病毒HA抗原结合的氨基酸位点结果与ELISA阻断试验结果相吻合。结论证明流感病毒H1N1亚型HA抗原上至少含有15个抗原表位,且通过ELISA阻断试验和计算机模拟分析得到了相互印证,为流感病毒血凝素HA抗原表位预测方法的完善及通用疫苗的研制提供了实验数据。
- 李慧瑾郭春艳赵彭花赵彭花李研李研李元高锦伟
- 关键词：流感病毒抗原表位
- 正己酸—低温乙醇沉淀法纯化小鼠腹水IgM类单抗的研究被引量：1
- 2012年
- 用不同有机酸–低温乙醇纯化腹水,确定纯化效果最好的有机酸为正己酸,纯化的IgM纯度可达95%,收率将近90%;用正己酸沉淀法配合低温乙醇沉淀法分别纯化不同抗原免疫的三种IgM型单抗,对多数IgM类抗体纯度可达到85%以上,IgM回收率大于85%,表明这种纯化方法适用于多数IgM类单抗的纯化;用硫酸铵沉淀法及正己酸–低温乙醇沉淀法纯化相同的抗体,对活性都不影响,但正己酸–低温乙醇沉淀法纯化的抗体纯度远高于硫酸铵沉淀法。因此正己酸–低温乙醇沉淀法是一种简单、快速、温和的从小鼠腹水中纯化IgM方法,可满足一般实验的要求。
- 赵彭花李研王鑫赵向绒高锦伟张群英李元胡军
- 关键词：纯化小鼠腹水
