刘子中
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 建立基于RNA免疫共沉淀技术的鼠疫耶尔森菌Hfq蛋白相关sRNA的体内验证方法被引量：1
- 2013年
- 目的:建立RNA免疫共沉淀方法,为鼠疫耶尔森菌Hfq蛋白相关非编码小RNA(sRNA)提供体内验证方法。方法:首先在RNA结合蛋白Hfq下游加入Flag标签,用Flag标签抗体进行免疫共沉淀,获得蛋白-RNA复合物,然后从沉淀的蛋白-RNA复合物中分离得到纯化的RNA;通过Western印迹检测各步骤Hfq蛋白的表达,再利用Northern印迹检测目的sRNA——RyhB1和RyhB2。结果:构建了带有Flag标签的RNA结合蛋白Hfq的载体,此载体转导入hfq缺失株后与鼠疫菌野生株的生长曲线无明显差异;通过RNA-蛋白免疫共沉淀技术鉴定出已知与鼠疫菌Hfq蛋白结合的2个sRNA——RyhB1和RyhB2。结论:建立了利用RNA-蛋白免疫共沉淀鉴定与鼠疫菌Hfq蛋白结合的sRNA的技术,为细菌sRNA的验证、功能研究和体内蛋白质与RNA相互作用研究提供了有利工具。
- 孟祥荣苏山春邓仲良刘子中杨瑞馥韩延平黄新祥
- 关键词：鼠疫耶尔森菌
- 鼠疫耶尔森菌外源获得性pPCP1质粒编码小RNA的筛选、鉴定与功能的初步研究
- 2015年
- 目的鉴定鼠疫耶尔森菌外源获得性p PCP1质粒编码的小RNA,并评价其在生物膜、压力耐受性和毒力方面的功能。方法基于前期鼠疫菌转录组测序结果,分析获得外源性p PCP1质粒编码的高丰度小RNA,提取鼠疫菌总RNA,利用Northern印迹实验验证这些小RNA存在与否。利用λ-Red同源重组技术敲除p PCP1质粒上已证实的小RNA,并对小RNA缺失株在生物膜褶皱形成、高盐耐受性和致病性等方面进行初步的表型筛选。结果与结论 Northern印迹法鉴定了鼠疫菌p PCP1质粒上7个小RNA的存在。在此基础上,获得5个小RNA的缺失突变株,其中sR3446缺失后鼠疫菌生物膜褶皱形成能力减弱;sR3446、sR3457、sR4338和sR4340缺失后鼠疫菌对高盐环境的耐受能力减弱,而sR6143缺失后对高盐环境的耐受能力增强;sR4338和sR4340缺失后鼠疫菌毒力有所减弱。上述结果提示,鼠疫菌外源获得性p PCP1质粒上的小RNA在鼠疫菌应激和致病过程中可能发挥重要作用。
- 王红朵刘子中王子迎杨瑞馥韩延平
- 关键词：鼠疫耶尔森菌小RNA毒力
- 鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的构建
- 2017年
- 目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测了目的小RNA的存在、大小以及转录起始位点等,将目的小RNA的全长导入到改造后的质粒中并构建小RNA的过表达菌株。结果与结论成功构建了小RNA sR01、sR02、sR03、HmsA 4株缺失株以及小RNA MicF、HmsA、CpxQ 3株过表达菌株。建立了基于λ-Red同源重组、100 nt以内短片段小RNA敲除方法和基于定点突变试剂盒改造质粒的小RNA过表达菌株构建方法。
- 高肖芳刘子中李文亮王红朵杨瑞馥韩延平
- 关键词：鼠疫菌小RNA过表达
- 温度和酸度对田鼠型鼠疫耶尔森菌psa位点的转录调控研究被引量：1
- 2013年
- 目的研究温度和酸度对田鼠型鼠疫耶尔森菌psa位点的转录调控作用。方法首先设计相关跨基因引物,用RT-PCR方法验证psa位点的相关操纵子结构。扩增操纵子首基因上游启动子区500 nt序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,将重组质粒转入鼠疫菌中,通过测定β-半乳糖苷酶活性差异来判断不同温度(26和37℃)和酸度(pH 6.0和pH 8.0)对psaE和psaA的调控关系。最后提取鼠疫菌在上述不同温度和酸度条件下的总RNA,采用引物延伸实验进一步明确温度和酸度对psaA的调控关系。结果与结论 RT-PCR结果证实了田鼠型鼠疫菌的psa位点由操纵子psaEF和psaABC构成;半乳糖苷酶和引物延伸实验结果显示在37℃、pH 6.0培养条件下psaABC的转录水平最高,而psaEF的转录水平无明显变化,提示psaA的表达水平在37℃酸性条件下表达量最高,psaE则不受温度和酸度的调控。
- 刘子中张义全周冬生杨瑞馥韩延平
- 关键词：温度酸度
- 小RNA对细菌生物膜形成的调控研究进展被引量：1
- 2017年
- 小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即生物膜,其主要由蛋白质、多糖和DNA组成。最新研究表明,小RNA在调控细菌生物膜形成的系统中发挥着重要的作用。小RNA通过与靶标mRNA碱基配对或与调节蛋白相互作用,在细菌生物膜形成中发挥调控作用。该文综述了小RNA对细菌生物膜形成的调控机制和途径,阐述了3种经典的小RNA调控细菌生物膜形成的模型,以及小RNA调控对细菌生物膜形成的研究现状和发展方向。
- 高肖芳刘子中李文亮杨瑞馥韩延平
- 关键词：小RNA生物膜C-DI-GMP
