周冬生
- 作品数：112 被引量：452H指数：13
- 供职机构：安徽医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 副溶血弧菌VPA1405多克隆抗体制备及应用被引量：3
- 2013年
- 目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利用Western印迹检测VPA1405蛋白在野生株(WT)和opaR基因敲除株(ΔopaR)中表达水平的差异。结果成功表达纯化了6个与生物膜相关基因的蛋白;Western印迹结果显示OpaR调控子对VPA1405基因的表达呈正调控,这与表型实验结果相符。结论成功建立了VP的Western印迹实验平台,该平台可用于后续VP生物膜相关基因的调控研究。
- 闫小娟张义全王丽刘梦颖杨世亚杨瑞馥周冬生邱景富
- 关键词：副溶血弧菌生物膜WESTERN印迹
- 肺炎克雷伯菌全基因组DNA芯片的研制和质量评价
- 2013年
- 目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结果与结论芯片杂交结果与理论预期结果一致。本研究成功研制了KP全基因组DNA芯片,并建立了基于全基因组DNA芯片的KP比较基因组学技术平台。
- 刘梦颖张义全王丽闫小娟杨世亚周冬生杨瑞馥邱景富
- 关键词：克雷伯菌肺炎DNA芯片比较基因组学
- 院内感染细菌多药耐药的质粒组学研究
- 周冬生殷喆冯娇张德福杨文慧杨慧盈王洁
- 核酸主动式杂交微电子芯片及其应用研究进展被引量：1
- 2002年
- 介绍了基于电场作用下核酸主动杂交原理的微电子芯片的微加工方法、分析系统组成、杂交分析技术原理 ,综述了该技术在点突变分析、单核苷酸多态性分析、简单串联重复序列分析、芯片上多重链替代扩增、病原物检测等方面的应用进展。
- 周冬生杨瑞馥
- H-NS对副溶血弧菌泳动能力的调控研究被引量：1
- 2015年
- 目的研究H-NS对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)泳动能力的调控作用。方法将VP接种于泳动实验平板上,37℃静置培养4.5 h后,通过比较不同菌株间菌苔直径的差异来判定H-NS对泳动表型的影响。提取WT和hns基因突变株(Δhns)的总RNA,采用实时定量RT-PCR方法研究H-NS对极鞭毛蛋白基因fla A的转录调控关系。将fla A启动子区DNA克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒转入WT和Δhns中,通过比较二者中β-半乳糖苷酶活性的差异研究H-NS对fla A的调控关系。结果与结论动力表型结果显示,H-NS可促进VP的泳动能力;实时定量RT-PCR和Lac Z报告基因融合实验结果表明H-NS正调控fla A的转录。这表明H-NS至少可通过激活fla A的转录而促进VP的泳动能力。
- 王洁林磊孙凤军董新波侯书宁周冬生殷喆张义全
- 关键词：副溶血弧菌
- 一种提取细菌mRNA的方法
- 本发明公开了一种新的提取细菌mRNA的方法，该方法是先设计针对5S、16S和23S rRNA的保守序列寡核苷酸探针，并进行生物素标记，标记的探针加入到包被链霉亲和素的顺磁颗粒中，再加入细菌总RNA提取液，5S、16S和2...
- 庞昕周冬生杨瑞馥
- 文献传递
- 鼠疫菌OxyR蛋白对katY的转录调控机制
- 2013年
- 目的利用分子生物学实验研究OxyR对katY的转录调控机制。方法 PCR扩增katY的整个启动子区DNA序列全长,并纯化鼠疫菌His-OxyR蛋白,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)和DNase I足迹实验研究OxyR对katY启动子区的结合位点;提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸实验研究katY的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对katY的调控关系;进一步采用实时定量RT-PCR的方法验证OxyR对katY的调控关系。结果体外实验结果表明OxyR能结合到katY启动子区-101到-48之间的碱基上;鼠疫菌katY有一个转录起始位点G(-26)(翻译起始位点为+1),其转录表达受OxyR的激活。结论 OxyR能直接结合到katY启动子区而激活其转录表达。
- 倪斌张义全黄新祥杨瑞馥周冬生
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌OXYR转录调控
- PCR-RAPD分子生物学技术及其在植物抗病性研究中的应用被引量：5
- 2003年
- PCR-RAPD技术是一种高效的基因组DNA多态性分析技术,能够在对生物细胞或组织中DNA遗传多样性、亲缘关系及系统进化分子标记检测的同时进行基因定位与遗传作图。本文综述了PCR-RAPD技术的基本原理和应用范围,以及近年来在植物抗感病品种(品系)间亲缘远近关系分析、植物抗病性遗传基因的DNA分子标记与检测、植物抗病基因的标记和定位、植物抗病基因的分离与克隆、植物抗病育种的分子标记辅助选择与检测等植物抗病性分子机制研究方面的应用,并对该技术所存在的问题及应用前景进行了探讨。
- 李淼檀根甲赵彦周冬生章焰生江佳富吴新安承河元
- 质粒介导碳青霉烯耐药机制研究
- 碳青霉烯类抗生素是抗菌谱最广、抗菌活性最强的非典型β-内酰胺类抗菌药物,因具有对β-内酰胺酶稳定、毒性低、见效快、预后好等特点,已经成为治疗危重感染或初始抗生素治疗失败的复杂感染的最常用抗菌药物之一.但是,由于近年来碳青...
- 周冬生邱业峰殷喆冯娇
- 机械点样DNA微点阵技术及其在基因表达分析上的应用(I)被引量：11
- 2002年
- 从芯片制作、芯片杂交、芯片扫读与图像分析、基因表达数据分析等方面,详细介绍了机械点样DNA微点阵技术及其应用于多基因表达分析的基本步骤与原理。
- 周冬生杨瑞馥
- 关键词：基因表达分析生物芯片
