张丹
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Gαs慢病毒载体的构建、鉴定与表达被引量：2
- 2012年
- 目的:构建Gαs慢病毒表达载体并检测其表达性能,以便应用过表达技术进一步研究Gαs功能。方法:设计针对人Gαs DNA序列的带酶切位点引物,PCR扩增获得双链DNA后,与酶切后的FUW载体片段进行连接、转化,酶切及DNA测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆质粒,转染293T细胞。用293T细胞制备慢病毒颗粒,感染293T细胞后收集细胞全蛋白,用QPCR、Western blot检测慢病毒系统过表达效果。结果:证实人Gαs正确插入慢病毒载体,人Gαs慢病毒过表达质粒及相应病毒颗粒能有效过表达Gαs。结论:人Gαs慢病毒表达系统的成功建立,为应用过表达技术研究人Gαs慢病毒功能打下了基础。
- 王凯赵悦朱青张丹马瑾璐韩苏夏
- 关键词：慢病毒表达载体
- 放射治疗及放射治疗增敏研究进展被引量：4
- 2013年
- 放射治疗在肿瘤治疗中发挥着重要作用。放射治疗增敏研究是目前放射生物学领域的热点问题。目前,结合DNA损伤应答机制的肿瘤放射敏感性研究多集中在DNA损伤修复、细胞周期阻滞和细胞凋亡三个方面,本文就DNA损伤应答机制和放射治疗增敏之间的相关性及研究进展做一述评。我们认为,这方面的深入研究将会有力地推进放射医学的发展,进而更好地造福于患者。
- 张丹韩苏夏
- CDK1靶向shRNA质粒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:设计并构建CDK1-shRNA质粒表达载体,转染肝癌HepG2细胞,验证shRNA对肝癌HepG2细胞CDK1基因的沉默效应,便于进一步研究CDK1的功能。方法:设计针对CDK1mRNA靶序列的小发夹状RNA,化学合成含茎环结构的正义链与反义链,退火形成带内切酶粘/平末端的双链后,与酶切后的 pSIREN-RetroQ-ZsGreen载体片段进行连接、转化。经测序等方法鉴定重组克隆。将重组载体质粒经脂质体包裹转染肝癌HepG2细胞,realtime PCR及Western blot检测RNA干扰效果。结果:重组克隆经测序证实插入的序列正确,realtime PCR及Western blot检测证实设计的3条RNA干扰序列有效沉默了肝癌HepG2细胞中的内源性CDK1。结论:所制备的CDK1-shRNA在肝癌HepG2细胞中可获得高效转染,并能产生特异性的基因沉默效应,以CDK1为靶向的shRNA能够有效下调CDK1基因的表达,对周期依赖激酶CDK1功能的研究奠定基础。
- 赵晶韩苏夏马瑾璐黄辰张丹
- 关键词：SHRNACDK1基因沉默肝癌细胞
