王梅林
- 作品数：8 被引量：27H指数：4
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- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 人RhoB基因真核表达载体的构建和表达分析
- 2019年
- 旨在构建带Flag标签的人RhoB基因真核表达载体并检测其表达。提取人胚肾细胞HEK-293T总RNA并反转录获得cDNA;设计引物并利用PCR技术扩增RhoB基因的ORF序列;将所扩增序列插入到带Flag标签的pCMV5真核表达载体,插入位点位于限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间,得到真核表达载体Flag-RhoB。酶切并测序验证该质粒的准确性。将成功构建的Flag-RhoB质粒转染乳腺癌MCF7细胞、宫颈癌HeLa细胞以及结直肠癌HCT116细胞,Western Blotting检测RhoB蛋白的表达情况;转染Mv.1.Lu细胞,免疫荧光技术检测该蛋白在细胞中的定位情况。成功扩增出RhoB基因的ORF序列;连入pCMV5中获得真核表达质粒Flag-RhoB;酶切鉴定得到590 bp大小的片段,测序结果显示连入的是RhoB基因的cDNA序列与GenBank相符。Western Blotting结果显示,该质粒可在MCF7细胞、HeLa细胞及HCT116细胞中正确表达。免疫荧光实验显示过表达的RhoB蛋白主要定位于细胞膜上,细胞质中也有分布。成功构建了带Flag标签的人RhoB基因的真核表达载体,该质粒可在细胞中顺利表达。
- 王梅林牛精铃金若其徐莹莹蔡晶晶陈群力
- 关键词：RHOB真核表达免疫荧光
- 体现Blending Learning教育思想的几种新型教学模式解析——“双创”对教学改革提出的挑战被引量：5
- 2018年
- "双创"要求教育部门培养出来的人才不仅要具有系统丰富的科学知识,还要有创新意识、创新思维和创新能力。近年来,许多学者认识到Blending Learning教育思想的重要性,要求在教学中既要重视教师的主导作用,又要注重学生的主体地位,翻转课堂模式、泰微课+洋思模式和跨越式教学模式就是在此指导下出现的"学教并重"的新型教学模式,它们的成功应用也启发了高校教学,一些大学教师将微课、慕课等与课堂教学相结合,力图培养出"双创"所需要的创新型人才。
- 陈群力马灵筠万学东王梅林
- 关键词：BLENDINGLEARNING
- 去氢骆驼蓬碱对MCF7细胞增殖与迁移侵袭的影响被引量：4
- 2018年
- 目的:观察去氢骆驼蓬碱对人乳腺癌MCF7细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,并探究其潜在的分子机制。方法:体外常规培养人乳腺癌MCF7细胞,用不同浓度的去氢骆驼蓬碱(0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L)处理细胞,采用MTT法测定其对细胞增殖能力的影响;依据MTT实验结果,确定后续实验组药物作用浓度(0、5、10、20μmol/L),采用克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell实验观察去氢骆驼蓬碱对细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的影响;通过Western blot检测N-Cadherin、Vimentin及TGF-β通路相关蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,在浓度为5、10、20μmol/L时,去氢骆驼蓬碱可显著抑制MCF7细胞的增殖(P<0.05),其作用呈浓度及时间依赖性;并能使MCF7细胞克隆形成数、细胞迁移率、细胞侵袭率均显著降低(P<0.05);Western blot结果显示,N-Cadherin、Vimentin、Stat3、TGF-β、Smad2、Smad3、Smad4等蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论:综上所述,去氢骆驼蓬碱可能介导TGF-β通路,抑制相关蛋白的表达,经间充质转换的调节作用,抑制MCF7细胞的增殖、迁移与侵袭能力。
- 王梅林牛精铃高杨王元培张露芳张悦王萍
- 关键词：去氢骆驼蓬碱细胞增殖迁移
- 医学本科生创新型人才培养模式的研究与实践被引量：9
- 2020年
- 为了适应社会经济发展的需要,加强当代医学生的科研素质教育与创新能力的培养,是当今国际高等医学教育发展的新趋势。探索建立医学本科生的创新型人才培养模式,已成为亟待解决的教学课题。文章通过分析目前医学人才培养模式的现状,提出完善本科培养方案,改革教学方法,拓展创新性实验,建设创新性教师队伍,加强制度和科研平台建设等措施以加强医学本科生创新能力的培养,针对存在的问题提出建议,为医学本科生创新型人才的培养提供参考思路。
- 刘建成李三强马灵筠王萍王梅林陈群力胡澍万学东王勇
- 关键词：本科生
- 人WWP2蛋白的重组表达和多克隆抗体的制备
- 2017年
- [目的]克隆、表达并纯化人E3泛素连接酶蛋白WWP2的部分肽段(aa 324-517),制备兔源抗WWP2多克隆抗体并初步鉴定。[方法]PCR法从人胚肾细胞HEK-293T中扩增WWP2蛋白部分肽段的编码序列并构建原核表达质粒,大肠杆菌中诱导表达;GST亲和层析法纯化后进行TEV酶切,免疫新西兰兔制备多克隆抗体;间接ELISA、Western Blot、免疫荧光等方法检测抗体的灵敏度和特异性。[结果]构建了原核表达质粒pGEX-GST-WWP2(aa 324-517),原核表达并纯化了该重组蛋白。间接ELISA测定抗体效价可达1∶100 000以上,Western Blot检测该抗体可特异性识别体外纯化的WWP2蛋白和细胞内源性WWP2蛋白,细胞免疫荧光可检测到内源性WWP2蛋白。[结论]成功克隆、表达与纯化WWP2蛋白的部分肽段,制备出抗WWP2蛋白的多克隆抗体,可用于WWP2的免疫印迹和细胞免疫荧光分析。
- 牛精铃刘建成邓博马灵筠高杨王梅林
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 花姜酮对MCF7细胞的增殖和迁移与侵袭的影响及其作用机制研究被引量：7
- 2018年
- 目的研究花姜酮对乳腺癌MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及潜在分子机制。方法以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测花姜酮对MCF7细胞增殖的影响;根据MTT结果,将实验分为4组:空白对照组和低、中、高3个剂量实验组。实验组分别给予5,10,20μmol·L-1的花姜酮,空白对照组给予等体积的二甲基亚砜(DMSO),处理48 h。用划痕、Transwell和平板克隆实验测定花姜酮对MCF7细胞迁移、侵袭和克隆形成能力;以免疫印迹法检测相关蛋白表达情况。结果与空白对照组相比,低、中、高剂量花姜酮处理48 h后,MCF7细胞的增殖能力分别降至(89.7±5.4)%,(82.0±6.9)%,(62.7±4.6)%,迁移能力分别降至为(72.7±5.7)%,(55.0±3.9)%,(32.7±4.6)%,侵袭能力降至(77.6±7.8)%,(49.1±4.7)%,(40.8±6.2)%,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白对照组的克隆形成率为(41.4±6.3)%,低、中、高3个剂量实验组依次降至(27.4±4.8)%,(20.4±5.1)%,(5.4±0.8)%,实验组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。花姜酮处理MCF7细胞后,Ecadherin的表达量随低、中、高3个浓度而梯度上调,但N-cadherin的表达量随浓度而梯度下降,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论花姜酮能够抑制MCF7细胞的增殖、迁移和侵袭,机制可能与促进E-cadherin、抑制N-cadherin的表达有关。
- 王梅林牛精铃高杨梁喜超王颖熠杜隆隆高阳孙路易席守民
- 关键词：增殖迁移
- 人Smurf1基因真核表达质粒的构建和表达
- 2019年
- [目的]构建人Smurf1基因的真核表达载体并检测其表达和细胞亚定位。[方法]PCR法从人胚肾细胞HEK-293T中扩增Smurf1基因的ORF序列,将其插入到带Flag标签的p CMV5真核表达载体,插入位点为限制性内切酶SalⅠ和XbaⅠ之间。酶切并测序鉴定该质粒的正确性。将成功构建的质粒Flag-Smurf1转染HEK-293T细胞和Hela细胞,Western Blotting检测Smurf1蛋白的表达情况;转染Mv. 1. Lu细胞,免疫荧光检测Smurf1蛋白在细胞中的亚定位。[结果]成功扩增出Smurf1基因的ORF序列;连入p CMV5中获得了质粒Flag-Smurf1;酶切鉴定得到2. 2 kb大小的片段,测序结果显示连入的是Smurf1基因的c DNA序列正确。Western Blotting结果显示该质粒可在HEK-293T细胞和Hela细胞中表达,表达大小约为80 k Da,符合预期。免疫荧光实验结果显示过表达的Smurf1主要定位在细胞膜上。[结论]成功构建了带Flag标签的人Smurf1基因的真核表达质粒,该质粒可在细胞中顺利表达。
- 李莎莎贺虹崔冠一欧丽娜邓博王梅林
- 关键词：分子克隆转染免疫荧光
- 我校生物化学与分子生物学实验教学改革的回顾与展望被引量：3
- 2017年
- 生物化学与分子生物学实验是培养大学生动手能力、分析能力和科研探索能力的重要手段,完美的实验课教学是实现这一培养目标的保障。一直以来,教研室的老师都在不断地探索生物化学与分子生物学实验的教学改革之路,通过教学内容的细分与优化、教学方法的丰富与选择、教学手段的补充与更新、考核方式的改进与完善,力争为培养高素质、实用型和创新型医学人才打好坚实的基础。
- 陈群力王梅林万学东
- 关键词：生物化学与分子生物学实验教学教学改革
