郎君
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 种子特异性表达噬夏孢欧文氏菌crtB基因的植物表达载体构建被引量：1
- 2009年
- 利用PCR技术扩增出tp和crtB基因,胶回收后分别连接到pMD18-T载体测序。tp和crtB基因经酶切回收后通过pBlue-scriptKS质粒连在一起构建成pSK-tp-crtB,通过BamHⅠ和SacⅠ酶切,从pSK-tp-crtB载体上切下目的基因片段tp-crtB,替换pBI121-napA载体中的GFP基因,构建了tp-crtB基因在植物种子中特异性表达的载体pBI121-tp-crtB。转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α。测序鉴定后将阳性质粒转化农杆菌感受态细胞EHA105,经菌液和质粒PCR分析,获得了真核表达载体pBI121-tp-crtB,为crtB基因功能的进一步研究奠定基础。
- 刘慧娟郎君冯志国何光源
- 关键词：根癌农杆菌植物表达载体
- 一新富含甘氨酸果蝇抗菌肽在大肠杆菌中的优化表达被引量：6
- 2008年
- 目的:探索大肠杆菌原核表达系统制备具有生物功能的抗菌肽的最佳诱导条件。方法:将富甘氨酸果蝇抗菌肽基因的核心片段构建表达载体pET32a+中,经序列分析证实基因序列的正确性。在不同温度、不同时间和不同IPTG浓度进行诱导后,用15%SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,发现有一条分子量约8kD的新增蛋白条带。结果:研究表明在37℃菌液OD值0.8时诱导7h蛋白表达量最高(IPTG 0.7mmol/L,AMP 100μg/ml,0.3%Glu)。结论:获得了抗菌肽表达的最佳诱导条件,为大量诱导产生该抗菌肽奠定了理论基础。
- 冯志国刘慧娟陆婕郎君李燕娇陈正望
- 关键词：果蝇
- 富甘氨酸果蝇抗菌肽在大肠杆菌中的直接表达和纯化被引量：4
- 2009年
- 利用RT-PCR技术从果蝇总RNA中克隆出富甘氨酸果蝇抗菌肽基因,将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)的Nde I和Xho I酶切位点之间,然后用重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)利用乳糖操纵子的葡萄糖效应IPTG诱导表达,经15%SDS-PAGE、Western blot分析,在大约8 kD处出现了含6×His标签的抗菌肽蛋白。再以Ni-N TA纯化树脂进行亲和层析、脱盐、冻干,成功制备了富甘氨酸果蝇抗菌肽蛋白。
- 冯志国陆婕郎君李燕娇陈正望
- 关键词：果蝇纯化
