王婷婷
- 作品数：7 被引量：52H指数：4
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省科技厅社会发展项目广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蝇源抗菌肽的研究进展被引量：1
- 2006年
- 抗菌肽是阳离子型活性肽,是昆虫防御体系的重要组成部分,具有分子量小、热稳定性好、无免疫原性、广谱抗菌等特点。就蝇源抗菌肽种类、抗菌机理及其研究展望和存在问题进行了综述。
- 王婷婷金小宝朱家勇
- 关键词：抗菌肽
- 家蝇幼虫脂肪体cDNA文库的构建及初步鉴定被引量：26
- 2005年
- 目的 构建家蝇幼虫cDNA文库。方法 以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌免疫诱导 2 4h后的家蝇三龄幼虫为实验材料 ,从其脂肪体中提取总RNA ,运用SMART(switchingmechanismat 5 ,endofmRNAtranscript)技术构建家蝇幼虫cDNA文库。结果 初步测定 ,原始文库的滴度为 1.34× 10 6pfu/ml,原始文库重组率为 98.9% ,文库扩增后滴度达 2 .4 0 8× 10 9pfu/ml。从扩增文库随机挑取 12个克隆进行PCR扩增鉴定 ,结果显示所选的 12个噬菌体克隆均含有重组的cDNA ,插入片段大小为 4 0 0bp～ 15 0 0bp之间。结论成功构建了家蝇幼虫cDNA文库。
- 金小宝王婷婷朱家勇
- 关键词：家蝇CDNA文库SMART技术
- 家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中的表达及活性鉴定被引量：4
- 2010年
- 拟通过酵母系统表达家蝇抗菌肽Defensin基因,并初步鉴定其抗菌活性。采用限制性内切酶SacⅠ将分泌型重组表达质粒pPIC9K/Defensin线性化后,运用氯化锂转化法将其转入巴斯德毕赤酵母GS115中,行G418加压筛选和PCR鉴定;所得阳性转化子转至摇瓶,28℃条件下0.5%甲醇诱导表达,连续诱导培养4 d后,上清液进行Tricine-SDS-PAGE检测表达效果,并采用琼脂糖孔穴扩散法检测表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的抑制作用。结果显示,家蝇抗菌肽Defensin在毕赤酵母中得到了成功表达,表达产物对大肠杆菌E.coliK12D31的生长有抑制作用。说明酵母系统适合抗菌肽的表达。
- 金小宝王婷婷朱家勇李小波马艳褚夫江卢雪梅
- 关键词：家蝇抗菌肽DEFENSIN毕赤酵母
- 家蝇抗菌肽Defensin基因同向串联表达载体的构建和鉴定被引量：12
- 2006年
- 目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5′端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆入pMD18-T载体,利用pMD18-T载体的NdeⅠ位点和目的片断上的一对同尾酶(NheⅠ和XbaⅠ),多次酶切连接,串联成多拷贝的Defensin成熟肽基因,再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,最后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K。结果:PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功。结论:该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步进行高效表达打下基础。
- 王婷婷金小宝朱家勇刘雷山
- 关键词：家蝇抗菌肽多拷贝
- 家蝇抗菌肽Attacin在毕赤酵母中的异源表达被引量：7
- 2010年
- 目的构建家蝇抗菌肽(攻击素,attacin)成熟肽的重组表达质粒并转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,诱导attacin表达。方法 PCR扩增家蝇抗菌肽attacin基因成熟肽编码区,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-attacin用SacⅠ酶切线性化后,采用电转化法将其转入毕赤酵母GS115中,通过抗性、表型和PCR筛选多拷贝整合株。甲醇诱导毕赤酵母GS115/pPIC9K-attacin的表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物,采用琼脂糖孔穴扩散法检测其对大肠埃希菌K12D31的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-attacin构建成功,电转化获得多拷贝整合转化子毕赤酵母GS115/pPIC9 K-attacin,表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,在约Mr22000处有蛋白条带,表达产物可抑制E.coli K12D31的生长。结论家蝇抗菌肽attacin在巴斯德毕赤酵母中成功进行了表达。
- 李小波王婷婷马艳朱家勇刘漫宇金小宝
- 关键词：家蝇抗菌肽巴斯德毕赤酵母异源表达
- 家蝇抗菌肽基因attacin在毕赤酵母中的表达及其活性初步研究
- [目的]优化酵母表达条件，研究家蝇抗菌肽基因attacin在酵母真核表达系统的表达情况，并对表达产物的体外抗菌活性进行初步研究。试图摸索出一套稳定、高效的真核表达系统，为规模制备家蝇抗菌肽打下基础。 [方法]①根据...
- 王婷婷
- 关键词：抗菌肽基因毕赤酵母真核表达载体抗菌活性
- 文献传递网络资源链接
- 顺式串联家蝇抗菌肽Attacin基因真核表达载体的构建被引量：6
- 2006年
- 目的构建家蝇抗菌肽Attacin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法PCR法扩增家蝇抗菌肽Attacin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoR Ⅰ和Nhe Ⅰ位点,下游5′端带有NotⅠ和xbaⅠ位点,目的片断首先克隆入pMD18-T栽体,利用pMD18-T载体的Nde Ⅰ位点和目的片断上的一对同尾酶(Nhe Ⅰ和Xba Ⅰ),多次酶切连接,串联成多拷贝的Attacin成熟肽基因,再用EcoRⅠ和Not Ⅰ双酶切,最后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K。结果 PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明串联体基因重组质粒构建成功。结论该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步进行高效表达打下基础。
- 王婷婷金小宝朱家勇刘雷山
- 关键词：家蝇抗菌肽多拷贝
