张一军
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 萨能奶山羊β-防御素-3基因的克隆、序列分析及差异表达被引量：2
- 2014年
- β-防御素3（BD-3）基因在乳腺炎病程中有重要作用，目前尚未见有关山羊BD-3基因的研究报道，根据已发表的牛的BD-3基因序列的编码区（CDS）设计引物，经RT-PCR、连接T载体、挑取克隆和测序，成功克隆出长度为210bp的萨能奶山羊BD-3基因CDS区，并提交至GenBank。分析该CDS区的核苷酸和氨基酸序列，结果表明，所得核苷酸序列与牛、人的序列同源性分别为91．2％和80．9％；其氨基酸序列在萨能奶山羊BD-3蛋白的功能结构域（含23～67个氨基酸）与人的结构域同源性为99．9％，蛋白质三级结构相似。分别用热灭活的金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、大肠杆菌对乳腺上皮细胞刺激0、2、4、6、8h，观察BD-3基因的mRNA水平变化，结果显示，金黄色葡萄球菌刺激4h后，BD-3表达量达到最高，与对照组相比差异极显著（P〈0．01）；停乳链球菌刺激后，BD-3表达量持续升高，8h时与对照组差异极显著（P〈0．01）；大肠杆菌刺激后，BD-3表达量逐渐升高，4h时达到最高，但与对照组差异不显著，之后表达量逐渐下降。成功克隆出山羊BD-3基因，并且在金黄色葡萄球菌、停乳链球菌的刺激下有较高水平的表达，说明BD-3基因在乳腺炎病程中起到萤喜作用．
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- 关键词：克隆
- UNCO638和2-PCPA对山羊早期克隆胚胎组蛋白甲基化的影响
- 体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer， SCNT）胚胎较低的克隆效率一直限制着这项技术的广泛应用，供核的体细胞重编程不完全被认为是导致克隆胚胎发育率偏低、克隆个体发病率和死亡率偏高的主...
- 张一军
- 关键词：克隆胚胎组蛋白甲基化山羊
- 文献传递
- SAHA处理供体细胞对山羊克隆胚胎早期发育的影响被引量：2
- 2015年
- 为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂羟肟酸(SAHA)对体细胞和山羊核移植胚胎早期发育的影响,采用不同浓度SAHA处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其AcH3K9水平、细胞增殖能力、细胞周期及胚胎发育情况、乙酰化水平、多能性基因的表达水平。结果显示,SAHA处理后GEFs的AcH3K9水平显著上升(P<0.05),2.5μmol/L SAHA处理浓度即可显著提高GEFs组蛋白H3K9的乙酰化水平;浓度≤2.5μmol/L时,对细胞增殖能力无明显影响;浓度为5.0μmol/L和10.0μmol/L时,细胞活力显著下降(P<0.05)。AcH3K9上调会引起G0/G1和S期的细胞比例下降(P<0.05)。因此,选择经2.5μmol/L SAHA处理的供体细胞进行核移植。试验组的胚胎卵裂率和囊胚率显著高于对照组(P<0.05),其卵裂率接近于卵胞质单精子注射(ICSI)组。试验组的囊胚率乙酰化水平显著高于对照组,且低于ICSI组(P<0.05)。与对照组相比,试验组囊胚的Oct4、Sox2和Nanog的mRNA表达水平均上升(P<0.05),且均接近于ICSI组。说明,选用2.5μmol/L SAHA处理供体细胞可提高体细胞核移植效率和胚胎品质。
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- 关键词：羟肟酸克隆胚胎胎儿成纤维细胞山羊
- BIX-01294对山羊胎儿成纤维细胞生长状态和组蛋白H3K9二甲基化的影响被引量：1
- 2014年
- 为探讨BIX-01294对供核细胞的影响,使用不同浓度的BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其细胞活力、细胞周期、细胞凋亡、H3K9me2水平和多能性基因的mRNA水平。细胞活力检测结果显示,BIX-01294浓度在1.0μmol/L以下不会影响细胞活力,2.0μmol/L时24h和48h处理组的细胞活力显著下降(P<0.05),≥4.0μmol/L时所有处理组的细胞活力均极显著下降(P<0.01)。细胞周期和凋亡检测结果显示,H3K9me2下调会引起细胞周期的停滞和正常细胞的减少,其中BIX-01294在大于2.0μmol/L时G0/G1期细胞的比例极显著升高(P<0.01),4.0μmol/L时凋亡细胞极显著增加(P<0.01)。处理后的细胞H3K9me2水平均极显著下降(P<0.01),但大于1.0μmol/L的处理浓度能获得较好的下调效果。处理后细胞Oct4、Sox2和Nanog的mRNA水平均有不同程度的增加,其中Oct4和Nanog的mRNA水平增加极显著(P<0.01)。说明:采用1.0μmol/L BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞,可以下调H3K9me2水平,增加G1/G0期细胞比例,上调细胞多能性基因表达量,而且不影响细胞活力。
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- 关键词：山羊胎儿成纤维细胞
