贺晓丽
- 作品数：6 被引量：5H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 萨能奶山羊β-防御素-3基因的克隆、序列分析及差异表达被引量：2
- 2014年
- β-防御素3（BD-3）基因在乳腺炎病程中有重要作用，目前尚未见有关山羊BD-3基因的研究报道，根据已发表的牛的BD-3基因序列的编码区（CDS）设计引物，经RT-PCR、连接T载体、挑取克隆和测序，成功克隆出长度为210bp的萨能奶山羊BD-3基因CDS区，并提交至GenBank。分析该CDS区的核苷酸和氨基酸序列，结果表明，所得核苷酸序列与牛、人的序列同源性分别为91．2％和80．9％；其氨基酸序列在萨能奶山羊BD-3蛋白的功能结构域（含23～67个氨基酸）与人的结构域同源性为99．9％，蛋白质三级结构相似。分别用热灭活的金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、大肠杆菌对乳腺上皮细胞刺激0、2、4、6、8h，观察BD-3基因的mRNA水平变化，结果显示，金黄色葡萄球菌刺激4h后，BD-3表达量达到最高，与对照组相比差异极显著（P〈0．01）；停乳链球菌刺激后，BD-3表达量持续升高，8h时与对照组差异极显著（P〈0．01）；大肠杆菌刺激后，BD-3表达量逐渐升高，4h时达到最高，但与对照组差异不显著，之后表达量逐渐下降。成功克隆出山羊BD-3基因，并且在金黄色葡萄球菌、停乳链球菌的刺激下有较高水平的表达，说明BD-3基因在乳腺炎病程中起到萤喜作用．
- 茹坤苏峰张一军刘军罗艳徐乔璐贺晓丽林小湲郑月茂张涌
- 关键词：克隆
- 牛胎儿神经干细胞的分离培养与鉴定
- 2015年
- 分别采用机械分离法和酶消化分离法从胎龄为3个月的牛胎儿脑组织中分离培养牛神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),比较这2种方法对NSCs培养的影响。根据培养液中是否添加bFGF、EGF和FBS,选择不同的培养液培养NSCs,观察不同培养液对NSCs培养的影响,进而筛选出最适培养液。对NSCs及经诱导分化成的神经细胞进行生物学特性分析,包括细胞形态学观察和细胞免疫荧光检测。结果显示:组成成分为Neurobasal Medium+20μg/L bFGF+20μg/L EGF+20mL/L B27+100IU/mL青霉素+100IU/mL链霉素的神经干细胞培养液能够很好地支持牛胎儿NSCs的存活和增殖;机械分离法获得的牛胎儿NSCs的神经球数量和细胞活性要比酶消化分离法效果好;NSCs特异性标志物Nestin表达呈强阳性,Sox2、Nanog、Oct4和SSEA4等干细胞表面标志表达均呈阳性;经体外诱导的NSCs可分化为星形胶质细胞(表达GFAP)和神经元(表达βⅢ-tubulin)。结果表明,可从牛胎儿脑组织中分离培养出NSCs,NSCs可长期传代培养,具有分化功能。牛NSCs为克隆牛的供体细胞和转基因牛的受体细胞提供了细胞新来源。
- 郑月茂殷松娜齐英培贺晓丽冀艳华张涌
- 关键词：神经干细胞细胞培养分化
- 重组腺病毒介导的猪瘟E0基因在山羊乳腺中的表达
- 2016年
- 为使猪温病毒(CSFV)E0蛋白在奶山羊乳腺中得以合成和分泌,一段上游带有信号肽和His标签序列的CSFVE0基因通过腺病毒穿梭载体被插入到腺病毒质粒中,将此重组质粒转染293A细胞包装得到重组腺病毒Ad-hisE0。为证明其有效性,用Ad-hisE0感染293A细胞,实时定量PCR检测显示E0基因的表达显著提高。用Ad-hisE0分别感染牛乳腺上皮细胞和泌乳期山羊乳腺,SDS-PAGE和Western blot分析结果显示出E0蛋白分别位于26ku和48ku处的2条特异性条带。证实构建的腺病毒Ad-hisE0可以介导重组融合蛋白CSFV E0在山羊乳腺中的表达和分泌。
- 邵明豪卓伟伟贺晓丽刘军权富生张涌
- 关键词：CSFV腺病毒
- BoLA-Ⅰ类基因在牛体细胞克隆胚早期发育中的表达被引量：1
- 2015年
- 体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚,采用实时荧光定量PCR的方法检测经典BoLA-I基因和非经典BoLA-I基因在MⅡ期卵母细胞及各期胚胎中的相对表达量。结果显示,BoLA-I类基因在在牛MⅡ期卵母细胞中的相对表达量显著高于其在其他各时期胚胎的相对表达量(P<0.05);BoLA-I类基因在牛SCNT胚和IVF胚中相对表达量随胚胎发育的变化趋势类似,随着第1次及随后的卵裂,经典BoLA-I、NC1、NC2基因mRNA的表达下降到极微的水平;NC3、NC4在整个发育阶段均表达很低甚至难以检测到它们表达。结果表明,本试验通过在体外制备及培养SCNT胚胎,初步建立BoLA-I类基因在其的表达模式,为BoLA-I类基因参与母胎免疫机制的研究奠定基础,为进一步寻找评估胚胎质量的标志物提供依据。
- 王勃贺晓丽王勇胜王雪娇张涌郑月茂
- 关键词：SCNTQRT-PCR
- 腺病毒介导O型口蹄疫病毒VP1基因在关中奶山羊乳腺上皮细胞中的表达被引量：1
- 2016年
- 构建O型口蹄疫病毒抗原表位VP1的重组腺病毒载体,并在体外和体内培养试验中检测腺病毒介导VP1的表达。利用PCR技术,从原始质粒中扩增VP1基因片段,双酶切后连接载体构建重组穿梭质粒pHBAd-MCMVVP1-GFP,并经磷酸钙沉淀法携带骨架质粒按比例转染HEK293A细胞,获得P1代腺病毒颗粒,经多轮扩增后进行浓缩纯化,获得复制缺陷型腺病毒颗粒,测定病毒滴度。进行体外感染乳腺上皮细胞,通过GFP的荧光表达量确定最佳感染复数。然后用RT-PCR和Western blotting检测感染的乳腺上皮细胞中抗原表位VP1的表达。进一步用纯化的腺病毒通过乳头滴定法感染羊乳腺组织,检测其乳汁中VP1的表达。结果显示,PCR、双酶切和基因测序等结果表明基因扩增和腺病毒载体构建正确,以其感染关中奶山羊乳腺上皮细胞和乳腺组织时,均可检测到VP1蛋白表达。结果表明,成功构建了含VP1基因的重组腺病毒载体,且能够介导VP1基因在体外和体内培养试验中有效表达,为进一步研究纯化分离的VP1蛋白的抗原性并提高抗原优化技术提供基础研究。
- 贺晓丽林小湲刘军王勃卓伟伟张涌郑月茂
- 关键词：VP1乳腺上皮细胞奶山羊
- BIX-01294对山羊胎儿成纤维细胞生长状态和组蛋白H3K9二甲基化的影响被引量：1
- 2014年
- 为探讨BIX-01294对供核细胞的影响,使用不同浓度的BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其细胞活力、细胞周期、细胞凋亡、H3K9me2水平和多能性基因的mRNA水平。细胞活力检测结果显示,BIX-01294浓度在1.0μmol/L以下不会影响细胞活力,2.0μmol/L时24h和48h处理组的细胞活力显著下降(P<0.05),≥4.0μmol/L时所有处理组的细胞活力均极显著下降(P<0.01)。细胞周期和凋亡检测结果显示,H3K9me2下调会引起细胞周期的停滞和正常细胞的减少,其中BIX-01294在大于2.0μmol/L时G0/G1期细胞的比例极显著升高(P<0.01),4.0μmol/L时凋亡细胞极显著增加(P<0.01)。处理后的细胞H3K9me2水平均极显著下降(P<0.01),但大于1.0μmol/L的处理浓度能获得较好的下调效果。处理后细胞Oct4、Sox2和Nanog的mRNA水平均有不同程度的增加,其中Oct4和Nanog的mRNA水平增加极显著(P<0.01)。说明:采用1.0μmol/L BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞,可以下调H3K9me2水平,增加G1/G0期细胞比例,上调细胞多能性基因表达量,而且不影响细胞活力。
- 张一军刘军魏丽晓茹坤张曼贺晓丽权富生郑月茂张涌
- 关键词：山羊胎儿成纤维细胞
