张雪
- 作品数：6 被引量：8H指数：1
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- 杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与强直性脊柱炎的关联性被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunogloblin-like receptors,KIRs)基因多态性与强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)的关联性。方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析86例AS患者和412例无血缘关系的正常人中迄今发现的14个KIR基因和假基因KIRZ的基因频率、基因型和单倍型。结果:AS患者组活化型KIR3DS1、抑制型KIR2DL2和KIR2DL5的基因频率较对照组显著升高(P<0.05);携带2个或2个以上活化型KIR基因的AS患者明显高于对照人群;其余各KIR的基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活化性/抑制性杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因的失衡可能与AS的发生相关。
- 焦玉莲马春燕崔彬王来城张捷刘义庆张雪陈子江赵跃然
- 关键词：杀伤细胞受体基因分型
- 人白细胞介素26的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 克隆人白细胞介素-26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。对GenBank上报道的hIL-26基因进行序列分析后设计合成引物,利用RT-PCR技术从人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA中反转录并扩增得到人成熟肽IL-26基因。将得到的基因克隆到pMD18-T载体中,菌落PCR筛选、酶切鉴定并进行DNA序列分析。用BamHI和EcoRⅠ将目的片段切下,插入表达载体pBV220相应的位点。42℃热诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的20%,Western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白,分子筛纯化后纯度达90%以上。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性,用RT-PCR检测复性的重组蛋白能促进PBMC合成IFN-γ。
- 刘义庆陈子江张雪王来城焦玉莲张捷马春燕崔彬高新谱刘正敏吴侃赵跃然
- 关键词：白细胞介素
- 人NKp46基因克隆及其在大肠杆菌中的表达和纯化
- 2006年
- 目的:对人NKp46进行基因克隆并探讨其在大肠杆菌中重组表达和纯化。方法:用RT-PCR法自人外周血单个核细胞总RNA扩增hNKp46片段(约900 bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp46重组质粒,分离hNKp46片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp46。转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和Western Blotting鉴定表达的重组蛋白。采用His.BindPurification Kit对重组蛋白进行纯化。结果:RT-PCR扩增的DNA片段与hNKp46 cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp46的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp46的cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为38.5 kD,其表达量达菌体总蛋白的40%左右。Western Blotting分析显示,重组蛋白能特异地与抗His.Tag抗体结合。纯化得到纯度为95.5%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论:成功构建了人NKp46表达载体,并获得了稳定表达的工程菌株,纯化了重组蛋白。
- 高新谱刘正敏王来城焦玉莲刘义庆张雪赵跃然
- 关键词：基因克隆原核表达大肠杆菌蛋白纯化
- 人IL-26的基因克隆及其真核表达载体的构建
- 2006年
- 目的:克隆人白细胞介-素26(human interleukin-26,hIL-26)基因,构建其真核表达载体并探讨在真核细胞中的表达。方法:提取人外周血单个核细胞总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hIL-26基因;目的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌E.coli-DH5α,菌落PCR、酶切分析和DNA序列分析鉴定重组克隆。用SalⅠ和EcoRⅠ将目的片段切下,插入pIRES2-EGFP的相应位点,构建表达载体pIRES2-EGFP/hIL-26并进行酶切鉴定。将重组质粒用非脂质体试剂Fugene 6转染至COS7细胞中。结果:重组克隆载体pMD18-T/hIL-26内插入片段序列与GenBank上报道的hIL-26基因序列完全一致;pIRES2-EGFP/hIL-26经酶切鉴定与预期结果一致;荧光显微镜观察可见转染后的细胞有荧光出现,Western blotting鉴定证明hIL-26基因得到了有效表达。结论:成功构建了hIL-26基因的真核表达载体并在真核细胞中获得了有效表达。
- 刘义庆王来城焦玉莲张捷马春燕崔彬高新谱刘正敏张雪赵跃然
- 关键词：基因克隆COS7细胞真核表达载体
- 山东1510例非综合征型耳聋患者常见致聋基因突变分析
- 白晓卉徐磊张凤国肖云张雪张国栋李建峰王海波
- 人NKp44基因克隆及其在大肠埃希菌中的表达和纯化被引量：1
- 2007年
- 目的:对人NKp44进行基因克隆及其在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础。方法:提取人外周静脉血单个核细胞,培养并加入IL-2进行诱导后收集细胞,分离纯化外周血总RNA。用巢式PCR扩增hNKp44片段(约860bp),克隆至质粒载体pMD18-T,并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRⅠ和NcoⅠ消化pMD18-T-hNKp44重组质粒,分离hNKp44片段,并插入原核表达载体pET30a(+)的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pET30a(+)-hNKp44。转化菌株BL21(DE3)经IPTG诱导,用SDS-PAGE和WesternBlot鉴定表达的重组蛋白。采用His.BindPurificationKit对重组蛋白进行纯化。结果:巢式PCR扩增的DNA片段与hNKp44cDNA大小一致。重组质粒pMD18-T-hNKp44的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hNKp44的cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为35.4×103,其表达量达菌体总蛋白的40%左右。WesternBlot分析显示,重组蛋白能特异地与抗His.Tag抗体结合。纯化得到纯度为95%的重组蛋白,纯化回收率达40%。结论:已经成功地构建了表达重组hNKp44的工程菌株。
- 高新谱刘正敏王来城焦玉莲刘义庆张雪赵跃然
- 关键词：杀伤细胞克隆
