成思佳 作品数:4 被引量:20 H指数:3 供职机构: 中国药科大学生命科学与技术学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省科技支撑计划项目 中央高校基本科研业务费专项资金 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
多重环介导核酸等温扩增技术检测血液中常见病原体 被引量:6 2013年 背景:血液安全性筛查是输血前必要检测项目。目前临床采用血清学检测技术,存在较长的检测窗口期,易产生假阴性检测结果,造成输血交叉感染。目的:建立多重环介导核酸等温扩增技术,实现在一管反应体系内同时检测四种病原体:乙肝病毒,丙肝病毒,艾滋病毒和梅毒螺旋体。方法:通过限制性酶切处理多重环介导核酸等温扩增产物,利用酶切产物的长度分析扩增产物的种类,从而分析待测样本中含有何种血液病原体。结果:检测164例临床样本,其检测结果可以通过琼脂糖电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳及芯片电泳分析,且均可实现对多重扩增产物的酶切片段进行区分和鉴别。结论:多重环介导核酸等温扩增技术可以同时单管检测多种待测血液病原体,可以为临床提高简单、快速、高灵敏和高特异的检测技术。 梁超 成思佳 王聪 初亚男 奚涛 周国华高灵敏度等温扩增法可视化检测血液中的病毒核酸 被引量:2 2011年 目的探讨便携式、可灵敏、快速检测血液标本中病毒核酸的方法。方法以HBV病毒为例,针对其基因组保守序列设计特异性引物,采用环介导等温扩增法(LAMP)对待测HBV标本做核酸目标序列扩增,以高灵敏双链DNA嵌合荧光染料为指示剂,根据荧光信号指示扩增反应产物的有无;将本法与实时荧光PCR法对临床标本做HBV检测的对照分析。结果建立了血液病毒核酸的可视化检测方法,研制出扩增检测一体化仪器;灵敏度达到可在<1 h完成10 cp/管的HBV核酸扩增反应和产物检测。62例实时荧光PCR检测为HBV阳性的临床标本,本法亦都检测为阳性;而从42例实时荧光PCR检测为HBV阴性的临床标本中,本法检出了6例HBV阳性。结论所建立的方法和装置可实现高灵敏度单管快速检测血液病毒核酸,为特殊现场环境中的血液安全性筛查提供了新的手段。 梁超 成思佳 武海萍 周国华关键词:血液安全 环介导等温扩增 核酸检测 可视化等温扩增法快速筛查并分型禽流感病毒 被引量:4 2011年 目的:建立一种通用筛查禽流感病毒及其3种亚型的快速核酸检测方法。方法:对20例已知样本扩增禽流感病毒共有的M基因上的一段保守序列快速筛查并确定是否为禽流感病毒,扩增禽流感病毒(H5N1,H7N7,H9N2)3种亚型特异性HA基因上一段序列鉴定禽流感病毒的基因型。采用环介导等温扩增法检测核酸,用肉眼观察双链嵌合染料SYBR Green I荧光显色信号强度。结果:3种禽流感病毒亚型的检测灵敏度均为10拷贝/管,3组引物间无非特异性扩增。18例阴性,2例阳性,准确性及特异性均为100%。结论:建立的核酸检测方法适合现场快速检测禽流感病毒及其3种亚型。 初亚男 成思佳 梁超 周国华关键词:禽流感病毒 环介导等温扩增 H5N1亚型 H9N2亚型 单管高灵敏度等温扩增技术快速检测甲型H1N1流感病毒 被引量:11 2011年 建立了单管逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)快速检测甲型H1N1流感病毒的方法。针对甲型H1N1流感病毒的M基因和HA基因的保守区,设计了两组特异性引物,分别用于筛选甲型流感病毒及鉴定甲型H1N1流感病毒。对反应体系中的关键因素进行优化,反应结果可直接通过浊度或者SYBR GreenⅠ荧光进行判定。本方法最低可检测到10拷贝/管的甲型H1N1流感病毒。为验证方法的可行性,对30例临床样本进行了检测,与美国疾病控制与预防中心(CDC)的TaqMan方法进行对比,检测的灵敏度和特异性分别为92%和100%。本方法实现了单管快速检测甲型H1N1流感病毒,为甲型H1N1流感病毒的现场检测提供了新方法。 成思佳 陈之遥 初亚男 崔仑标 史智扬 马寅姣 周国华关键词:甲型H1N1流感病毒 SYBR