邢培川
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国海洋大学医药学院更多>>
- 发文基金：海洋公益性行业科研专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- 一株海洋高产壳聚糖酶菌株Renibacterium sp．QD1的筛选鉴定及产酶研究被引量：2
- 2013年
- 目的:获得高产壳聚糖酶菌株。方法:利用唯一碳源法富集产壳聚糖酶菌株,并利用平板水解圈和酶活力检测进行复筛。利用PCR克隆16S rDNA基因进行种属鉴定。利用SDS-PAGE凝胶原位复性鉴定野生菌株产壳聚糖酶的数量和大小。利用单一变量法进行发酵条件的初步优化。结果:获得了一株高产壳聚糖酶菌株,对该菌株的16S rDNA序列进行比对和分析发现该菌株属于Renibacterium属,将该菌命名为Renibacterium sp.QD1。SDS-PAGE电泳和凝胶原位复性结果显示,该菌株能产生一种胞外壳聚糖酶,分子量大小在25ku左右。对其发酵条件进行初步优化,用成分为壳聚糖(0.50%)、KH2PO4(0.10%)、K2HPO4(0.20%)、MgSO4(0.07%)、NaC(l0.10%)、CaCl2(0.01%)、酵母粉(0.05%)、马铃薯浸粉(%)、蛋白胨(0.2%)的培养基发酵,其粗酶活力可达400U/mL,比文献报道的活力最高的Microbacterium sp.OU01高近4倍。结论:获得了一株高产壳聚糖酶菌株,该菌株的发现为壳寡糖的制备提供了新的工具。
- 邢培川刘丹于文功路新枝
- 关键词：壳聚糖酶
- 利用Site-Finding PCR克隆琼胶酶基因被引量：4
- 2013年
- 目的:新型琼胶酶基因的筛选。方法:根据α-琼胶酶基因序列的同源性,设计了兼并引物,利用兼并PCR对所筛选到的琼胶酶产生菌株进行筛选,阳性菌株进行16s rDNA序列测定并构建了进化树。利用染色体步移技术Site-finding PCR获得目的基因的上下游序列,经过拼接获得全长的目的基因序列,并利用Blast对其进行分析。将目的基因插入pET 24a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用平板水解圈初步鉴定了重组酶的性质,并利用DNS法检测了重组酶发酵上清液的酶活。结果:获得了一株疑似α-琼胶酶产生菌株,16s rDNA序列鉴定显示为Thalassomonas sp.,命名为Thalassomonas sp.LD5。获得了一个新的基因,命名为agaD。agaD开放阅读框长4401 bp,编码1466个氨基酸,理论分子量为158.8kDa。序列分析表明,agaD编码的蛋白AgaD与已有的两种α-琼胶酶的相似性分别为89%和77%。重组AgaD经诱导后可以直接降解琼胶平板产生水解圈,其发酵上清液酶活为0.2 U.ml-1,说明该蛋白为琼胶酶。结论:采用分子克隆技术分离出新的琼胶酶基因,该基因的发现为活性寡糖的制备提供了新的工具。
- 刘丹邢培川于文功路新枝
- 一株海洋细菌Renibacterium sp.QD1中的壳聚糖酶及其产酶条件研究
- 壳聚糖(chitosan)也叫甲壳胺，它是由氨基葡萄糖及少量乙酰氨基葡萄糖残基通过β-1、4糖苷键连结而成的高聚物，是几丁质进一步脱乙酰基形成的产物。壳聚糖具有许多生理活性，但是由于多糖存在分子量大、不溶于水、生物利用度...
- 邢培川
- 关键词：海洋细菌壳聚糖酶发酵条件基因克隆
- 文献传递
- 海洋细菌Renibacterium sp.QD1产壳聚糖酶发酵培养基的统计优化被引量：7
- 2014年
- 目的:通过对发酵培养基的统计优化提高海洋细菌Renibacterium sp.QD1壳聚糖酶的产量。方法:通过Plackett-Burman实验筛选影响壳聚糖酶产量的显著性因素。在此基础上利用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,利用响应面法进行回归分析。结果:确定了影响壳聚糖酶产量的3个显著因素,其最佳浓度分别是壳聚糖14.23g/L、酵母粉4.72g/L、p H6.42。经模型验证,预测值与验证实验平均值接近。结论:在最优培养基中壳聚糖酶活力达到608.11U/m L,比优化前提高了52.03%。
- 马靖峰郭晓凤刘欢邢培川于文功路新枝
- 关键词：壳聚糖酶PLACKETT-BURMAN设计
