胡朝霞
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBx、MHBs^(t155)真核表达载体构建及在HepG2细胞中的表达被引量：3
- 2012年
- 目的建立稳定、高效的HBx、羧基末端截短的中分子表面蛋白(MHBst)体外表达细胞株,以进一步研究HBx、MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及其机理。方法设计特异性引物,采用PCR方法从adr亚型HBV质粒pHBV DNA中扩增HBx、羧基末端截短至155位氨基酸的中分子表面蛋白(MHBst155)编码基因,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFP-C1的BglⅡ、KpnⅠ和BglⅡ、BamHⅠ酶切位点,转化宿主菌DH5α,提取质粒,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。采用脂质体介导将空载体、重组质粒分别转染到人肝肿瘤细胞株HepG2中,G418筛选抗性细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP表达,挑取表达GFP的抗性克隆扩大培养、传代。采用RT-PCR、蛋白印迹检测抗性细胞中HBx、MHBst155的mRNA及蛋白水平。结果经酶切及测序鉴定成功构建了pGFP-HBx、pGFP-MHBst155重组表达载体,将空载体及重组质粒转染HepG2,经G418筛选约20 d获得抗性细胞克隆。将带有绿色荧光的抗性克隆扩大培养并经传代40次,细胞仍表达强的绿色荧光。RT-PCR及蛋白印迹检测表明转染重组体的HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-MHBst155细胞有相应的条带,而空载体、空白对照组未出现条带。结论成功构建了HBx、MHBst155真核重组表达载体pGFP-HBx、pGFP-MHBst155,获得了稳定表达融合蛋白GFP-HBx、GFP-MHBst155的HepG2细胞系,为进一步研究HBx及MHBst蛋白在肝癌发生中的作用及分子机制构建了良好的平台。
- 康艳红杨林麦丽张绍全胡朝霞谢奇峰高志良
- 关键词：HBXGFP细胞株
- 溶瘤腺病毒SG611联合顺铂对肝癌细胞HepG2的协同杀伤作用及其机制被引量：1
- 2015年
- 目的探讨溶瘤腺病毒SG611联合顺铂(DDP)对肝细胞癌(肝癌)细胞Hep G2的协同杀伤作用及其作用机制。方法利用携带GFP的腺病毒载体SG611感染人肝癌细胞Hep G2,流式细胞术检测SG611感染效率,CCK-8实验检测SG611联合DDP对肝癌细胞Hep G2杀伤效应,结晶紫染色法观察细胞毒性作用;4'6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法检测细胞凋亡率,Western blot检测E1A蛋白的表达。实验数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果 SG611-EGFP感染肝癌细胞Hep G2荧光显微镜下观察,随着感染复数(MOI)的增加,GFP阳性细胞数目明显增加,流式细胞术检测SG611的感染效率分别为0.18%、6.36%、50.60%、73.20%、86.80%、90.50%,呈剂量依赖性。MOI=10的SG611与1.5μg/ml的DDP联合应用的细胞存活率为(33.2±1.2)%,明显低于单用SG611的(88.8±8.9)%(LSD-t=-7.83,P<0.05);且联合应用对肝癌细胞Hep G2的细胞毒性作用明显强于单用SG611。两者联合应用时肝癌细胞Hep G2凋亡率为(23.9±1.5)%,明显高于单用SG611、DDP的(15.3±1.0)%、(12.4±1.1)%(LSD-t=10.56,21.34;P<0.05);且联合应用时肝癌细胞Hep G2的E1A表达明显增强。结论溶瘤腺病毒SG611联合DDP对肝癌细胞Hep G2具有协同杀伤作用。SG611增加DDP化疗敏感性及DDP增强SG611增殖能力可能为其协同杀伤的作用机制。
- 胡朝霞台艳刘炜邱东波张琪
- 关键词：顺铂药物协同作用
- HBV特异性CTLs表面CD244和PD-1共表达与慢性乙型肝炎严重程度的相关性被引量：8
- 2012年
- 目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血乙型肝炎病毒(HBV)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)表面CD244与程序性死亡蛋白1(PD-1)的共表达模式及其与疾病进展的关系。方法:采集81例CHB患者和14例健康者外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC);利用主要组织相容性复合体I(MHC-I)-肽五聚体技术标定HBV表位特异性CTLs;荧光抗体标记细胞表面CD244与PD-1分子,流式细胞术检测。结果:CHB患者CD244与PD-1在HBV特异性CTLs表面共表达较总CD8+T细胞表面明显升高(67.48%±17.16%vs 14.01%±7.97%,P<0.01);HBV感染的不同临床类型中,轻中度的CHB患者HBV特异性CTLs表面CD244与PD-1共表达水平较免疫耐受者明显升高(72.05%±16.86%vs 53.11%±18.05%,P<0.05),肝衰竭组CD244与PD-1共表达水平较轻中度CHB下调(63.11%±13.87%vs 72.05%±16.86%,P<0.05)并伴随干扰素γ(IFN-γ)分泌功能的恢复(30.95%±20.29%vs 13.63%±10.46%,P<0.01)。结论:CHB患者HBV特异性CTLs细胞表面高共表达CD244与PD-1分子,CD244与PD-1共表达在CHB不同临床类型中有差异,并与IFN-γ分泌水平呈负相关,提示CD244可能与CHB患者HBV特异性CTLs功能低下及CHB疾病进展相关。
- 王姣邓洪谢冬英朱建芸胡朝霞梅明珠高志良
- 关键词：T淋巴细胞
- 乙型肝炎病毒X蛋白通过活化ERK1/2上调DNA甲基转移酶1表达
- 2016年
- 目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白对DNA甲基转移酶1表达的影响及调控机制。方法以Hep G2、Hep G2/EGFP及Hep G2/EGFP-HBx细胞作为实验细胞,采用Real-time PCR法及Western blot法检测细胞DNMT1的m RNA及蛋白表达水平。用不同剂量的MEK1/2特异性抑制剂U0126处理Hep G2/EGFP-HBx细胞,采用Western blot法检测总ERK1/2、磷酸化ERK1/2及DNMT1蛋白表达水平。结果 Hep G2/EGFP-HBx细胞的DNMT1 m RNA相对表达量平均值为9.464±0.22,明显高于Hep G2细胞(1.00±0.0)(t=60.64,P=0.0002)及Hep G2/EGFP细胞(0.95±0.29),差异有统计学意义(t=32.78,P=0.0011)。与Hep G2、Hep G2/EGFP细胞相比,Hep G2/EGFP-HBx细胞磷酸化ERK1/2及DNMT1蛋白表达水平有明显升高;而MEK1/2特异性抑制剂U0126处理细胞后,磷酸化ERK1/2磷酸化水平及DNMT1蛋白表达水平明显降低。结论 HBx可通过活化ERK1/2信号通路上调DNMT1的表达,这可能是HBx调控细胞基因甲基化及参与HBV相关肝细胞癌发生的机制之一。
- 吴英杰杨林朱建芸康艳红胡朝霞高志良
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白DNA甲基转移酶1ERK1/2信号通路
- 乙肝相关慢加急性肝衰竭患者Th17细胞水平及其临床意义被引量：5
- 2011年
- 目的探讨乙肝相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)外周血Th17细胞的表达及其与临床转归的关系。方法采用流式细胞术分析外周血中Th17细胞比例,flowcytomix技术检测血清中IL-17的水平,荧光PCR检测HBV-DNA载量,ELISA检测HBeAg的状态,分析Th17细胞及IL-17的表达与HBV病毒及预后的关系。结果与健康对照组及慢乙肝组相比,HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17水平明显升高(P<0.01),且Th17细胞与IL-17水平成正相关;进一步分析发现不同病毒复制水平及HBeAg状态的HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17的差异无统计学意义;与预后好转患者相比,预后不佳HBV-ACLF患者Th17细胞及IL-17水平明显增高(P<0.05),且IL-17的水平与终末期肝病评分成正相关。结论 Th17细胞可能参与了HBV-ACLF的发病机制,且IL-17的表达越高可能提示患者的预后不佳。
- 张耿林谢冬英林炳亮彭亮谢婵张绍全张宇锋赖箐朱建芸张英黄仰甦胡朝霞高志良
- 关键词：慢加急性肝衰竭IL-17TH17细胞
