孙海亮
- 作品数：4 被引量：24H指数：2
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- 鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测被引量：19
- 2008年
- 在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPVgB蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPVgB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490>0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490>2。应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%。
- 潘华奇曹瑞兵刘磊孙海亮姬向波陈勇军陈溥言
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达间接ELISA
- 含LoxP位点和EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体的构建被引量：7
- 2008年
- 提取鸭瘟病毒(DPV)疫苗株基因组DNA为PCR扩增模板,并根据GenBank已发表的DPV UL区UL24、UL23、UL22基因序列,选择保守序列设计了两对引物,分别扩增出位于UL23(TK)两侧的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R),L包括部分UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失468个核苷酸.将L片段和R片段克隆于pBluescript M13-载体上,获得了pSKLR;再将含2个LoxP位点的表达绿色荧光蛋白的基因表达盒插入pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLR-EGEP-LoxP.大量提取pSKLR-EGEP-LoxP质粒,用脂质体转染鸭胚成纤维细胞,24 h后蛋白被正确表达,表明含LoxP位点的表达EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失的重组转移载体被成功构建.
- 潘华奇刘磊曹瑞兵魏凡华袁立科李娟孙海亮潘光炎
- 关键词：鸭瘟病毒EGFPTK基因
- 猪圆环病毒ⅡRep启动子功能分析及感染性克隆的构建
- 【目的】猪圆环病毒(PCV)分两个血清型PCV1和PCV2。PCV2与猪群中发生的多种疾病有关，其中断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)危害最为严重，给各国养猪业造成了巨大损失。因此，探讨PCV2的致病机理对于PCV2相...
- 孙海亮
- 关键词：猪圆环病毒感染性克隆
- 文献传递
- 猪圆环病毒Ⅱ型DT株的分离鉴定及动物模型建立被引量：1
- 2008年
- 应用PCR方法对江苏省东台市某猪场送检的一头无名高热病死猪的腹股沟淋巴结及肺脏病料进行检测.结果表明：该病料中存在PCV2;病料转染PK-15细胞,盲传3代后,IFA方法检测结果显示有明显的特异性荧光.利用设计的一对特异性引物对PCV2-DT株（东台分离株）全长基因进行扩增,测序结果显示所扩增基因为PCV2全长基因,大小为1 767 bp,包括11个完整的开放阅读框（ORF）.PCV2-DT分离株与其他20株PCV2分离株序列比较发现,核苷酸同源性都在95%以上,并与欧美株处于同一分支.PCV2-DTRep、Cap序列同国内分离的16株相比较,核苷酸序列同源性分别为97.5%～100%和94.2%～99.9%.氨基酸序列同源性分别为98.4%～99.7%和93.2%～99.6%.用PK-15细胞从病料中分离的细胞毒接种3头42日龄健康仔猪（血清学检测无PCV1、PPV、PRV等感染）,于首次接毒后的第10天出现发热、咳嗽、水样腹泻等症状,食欲几乎废绝,出现了PM-WS症状,初步建立了PMWS动物模型.
- 孙海亮曹瑞兵陈溥言魏威潘华奇刘磊
- 关键词：PCV2动物模型
